GB/T 36752-2018藜草花叶病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36752-2018 黎草花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Sowbαne mosαic virus 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局啦告 中国国家标准化管理委员会保叩 GB/T 36752-2018 目lj 昌 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共 和国厦门出入境检验检疫局、浙江大学。 本标准主要起草人：张永江、冯黎霞、向均、廖富荣、吴建祥、辛言言、李桂芬、陈青。 I GB/ T 36752-2018 附录 D （ 规范性附录） 实时荧光 RT-PCR 检测 D.1 试剂 核酸提取试剂同 C.1. 1 。 Tc1qMan 一步法反转录聚合酶链式反应混合物。 D.2 号｜物探针 上游引物SoMVF, 5-CAAACGATAGTCTCCACCACTGACAAAT-3 下游引物SoMVR, 5＇”TGTCAATGTTCCCTTGTACAGAT GT GG-3 探辛十 SoMVP: 5-F AM-CTGGTTGAGTGGCGT GGCCGTTA-T AMRA-3 。 D.3 核酸提取 方法同 C. 2. 1 。 D.4 实时荧光 RT-PCR 反应 反应体系：0. 2 mL 离心管中力ll 人 2 ×一步法反转录聚合酶链式反应？昆合物 1 0 µL， 酶混合物 0.6 v L , SoMVFOO µmol/L) 0. 4 µL, SoMVR (lO µmol/L)0.4 µL,SoMVP (lO µmol/L)0. 8 µL，模板 RNA 2 /.LL ，补 DEPC-H2 0 至20 µL。 设置阳性对照、阴性对照及空白对照。 反应程序： 45 °C 10 min ; 95 °C 10 mi口； 95 ℃ 15 s,60 ℃ 1 min ， 共45 个循环。 D.5 结果判定 在空白对照及阴性对照元 Ct 值且无扩增曲线、阳性对照 Ct 值《30 并出现典型扩增曲线的条 件下： 待测样品的 Ct 值二三40 时，判定 SoMV 阴性。 待测样品的 Ct 值ζ35 时，判定 SoMV 阳性。 待测样品的 Ct 值小于40 且大于 35 时，应重新进行测试；如果重新测试的 Ct 值注40 ，判定 SoMV 阴性； 如果重新测试的 Ct 值小于40 且大于 35 ，且分离曲线明显时，则判定结果为阳性。 9 GB/T 36752-2018