《仪器分析》指导书.doc

实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一、实验目的： 1、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。 2、熟悉绘制吸收曲线的方法，正确测定最大吸收波长λmax。 3、学会制作标准曲线的方法。 4、通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁,掌握722型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。 5.研究显色剂用量,显色时间，pH值对检测结果的影响。 二、实验原理： 1、方法原理 亚铁在pH3～9之间的溶液中与邻二氮菲（邻菲啰啉）生成稳定的橙红色络合物〔(C12H8N2)3Fe3+〕，然后于510nm波长处进行分光光度法测定。 2、方法的适用范围 本方法最低检出浓度为0.03mg／L，测定上限为5.00mg／L。适用于一般环境水和废水中铁的测定。 3、注 意 事 项 (1) 各批试剂的铁含量如不相同，每新配一次试液，都需要重新绘制校准曲线。 (2) 操作所用的玻璃器皿及比色皿用后的清洗，可用1+5的盐酸浸泡2h。 (3) 若水样含铁量较高时，可适当稀释；浓度低时可换用30mm 或50mm的比色皿。 三、仪器和试剂： 仪器：722型可见分光光度计 试剂： （1）铁标准贮备溶液（100μg/mL） 准确称取0.7020g (NH4)2Fe(SO4)2·6H2O置于烧杯中，加入20mLHCl（1+1）和少量水，溶解后，定量转移入1000mL容量瓶中，加水至刻度线，摇匀。 （2）铁标准使用液（10μg/mL） 用移液管移取上述铁标准贮备液（10μg/mL）10.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。 （3）盐酸羧氨溶液（10%） （4）邻二氮菲溶液（0.15%） （5）乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.5） （6）未知浓度的铁溶液（由实验教师统一配制） 四、实验内容和步骤： 1.准备工作 (1)准备所需的仪器 (2)开机预热：15～25分钟 (3)调节所需的波长 (4)校正：对仪器两点校正，切换仪器的工作状态（MODE），设置为“T”模式 a.用黑色挡光体挡住光路盖上盖子，观察窗口透射比T是否为0，如果不是0，按0%ADJ校正。 b.把比色皿对空位置，盖上盖子，观察透射比T读数是否为100，如果不是，按100%ADJ校正。 c.重复a.b的操作3次，确认设备进入稳定工作状态即可。 5.吸收池配对误差值的确认。要注意在溶液中消除。 6.不同浓度铁标液的吸收曲线 取六支50mL具塞比色管，分别加入铁标准使用液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0mL，再分别加入1mL盐酸羟胺（10%）溶液，2mL邻二氮菲（0.15%）溶液及5mL乙酸-乙酸钠（pH=5.5）溶液，加水稀至标线，充分混匀。显色放置15min后，用1cm比色皿，于510nm波长处，以零浓度空白管为参比，测量吸光度。 铁标液浓度（μg/mL） 10 吸取量（mL） 0 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 实测浓度（μg/mL/） 吸光度A （**标准曲线/工作曲线样图**） 样品测定： 取三支50mL具塞比色管，分别加入待测微量铁水样25ml，再分别加入1mL盐酸羟胺（10%）溶液，2mL邻二氮菲（0.15%）溶液及5mL乙酸钠（pH=5.5）溶液，加水稀至标线，充分混匀。显色放置15min后，用1cm比色皿，于510nm波长处，以零浓度空白管为参比，测量吸光度。 1# 2# 3# 吸光度A 浓度（μg/mL） 平均浓度（μg/mL） 7.绘制吸收曲线选择测量最大吸收波长 取两个50ml干净容量瓶，移取10.00μg/mL铁标准溶液4.00ml,6.00ml,10.00ml于其中一个50ml容量瓶中，然后在两容量瓶中各加入1ml 10%的盐酸羟胺溶液，摇匀。放置2min后，各加入2ml 0.15%邻二氮菲溶液，5ml乙酸钠（pH=5.5）溶液，用蒸馏水稀释至刻度线摇匀。用1cm吸收池，以试剂空白为参比，在400～590nm间，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标确定最大吸收波长λmax。 4.00ml λnm 400 430 460 490 495 500 505 506 507 508 509 A λnm 510 511 512 513 514 515 520 525 530 560 590 A 6.00ml λnm 400 430 460 490 495 500 505 506 507 508 509 A λnm 510 511 512 513 514 515 520 525 530 560 590 A 10.00ml λnm 400 430 460 490 495 500 505 506 507 508 509 A λnm