课件：氯霉素类药物在兽医临床上应用及其残留研究进展.ppt

微生物学法 微生物学法的原理是利用特定菌株与药物的作用来检测样品中CAP的种类和含量。常用方法有棉签法(Swab Test On Premises，STOP)和杯碟法(Cylinder Plate Method，CPM)。 STOP 用棉签蘸取动物组织液，置于涂满枯草杆菌的培养基中保存过夜，以棉签周围是否出现抑菌环及其直径大小来判断结果，STOP以前在美国、加拿大等国家肉类兽药残留筛选中广泛应用，检出限为1mg／kg，优点是设备简单，操作简便，缺点是特异性差，灵敏度低。 CPM 是将处理后的样品注入牛津杯，与含菌液的检测平板贴合，培养后根据抑菌圈直径的大小来判定结果，CPM 的检出限为0.1～2mg／kg，比STOP灵敏度高，并可在样品的处理中加入其他抗生素以消除干扰影响。微生物学法简便，费用低，但敏感性和专一性低，易漏检，也会出现假阳性，引起误判，但对于高残留样品进行残留筛选仍不失为一种好的方法。 免疫分析法 氯霉素免疫测定法包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫吸附测定法（ELISA) 。 RIA 的基本原理是用同位素标记药物样品，和非标记待测药物与CAP抗体结合竞争，样品中的被测物含量与测定的放射性活度成反比，常用的标记物是同位素H、C、I等，RIA的优点在于灵敏、特异、简便，但标记物易衰变，影响了其准确性。 ELISA是基于抗原和抗体反应而建立的。由于氯霉素是半抗原，不能刺激机体产生抗体。要使半抗原性物质具有免疫原性，就需使其与大分子载体物质（蛋白质）相结合制备人工抗原，而后将其作为抗原进行使用，动物体内即可产生相应特异性的抗氯霉素的抗体。在此基础上建立酶联免疫竞争法测定氯霉素含量。 ELISA避免了RIA存在的稳定性问题，更加简便、灵敏，检测限达到pg级，且同时可检测多数样品，是十分理想的快速筛选手段，缺点在于出现假阳性的概率较大，易引起误判。 因ELISA 具有快速、灵敏度高、专一性强的优势，在肉制品、水产品与环境中应用相当广泛。目前国内、外研制的氯霉素ELISA 检测试剂盒，广泛用于氯霉素的检测。如Randox公司提供的氯霉素检测试剂盒对组织中氯霉素的检测限可达0.02ng/kg，尿液中氯霉素的检测限可达0.01ng/kg，回收率为84% 以下，且与四环素、庆大霉素，氨苄青霉素无交叉反应，检测时间不到1.5 小时 定量测定法 目前国际公认的氯霉素的定量测定方法是气相色谱法(GC)和高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC) 气相色谱法 GC是1974年在美国官方分析化学家协会（AOAC）年会上提出的，原理是氯霉素均含有电子亲和性强的化学基团，可用电子俘获检测器进行测定。GC 是定量测定氯霉素残留较为经典成熟的方法，专一性强，灵敏可靠，检测限低（小于1ug/kg),但由于受到氯霉素挥发性和热稳定性的限制,需要衍生化程序,比较繁琐,一定程度上限制了GC 的应用。 高效液相色谱法 原理：氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素都有很强的紫外吸收，因此可直接用HPLC/UVD 测定。 样品制备不需要衍生化过程，操作简单，但UVD选择性较差，具有紫外吸收的杂质都会产生干扰，因此HPLC／UVD的检测限比GC高，一般在5ug／kg，样品前处理必须排除具有紫外吸收的内源性杂质的干扰。 确证法 气—质联用法 GC／MS用于动物性食品中CAP的残留确证已是较为成熟的方法，其原理是CAPs硅烷化后都有几个丰度较大的电子轰击碎片离子，便于进行定性鉴别，灵敏度高，在ng级以下。气相色谱／选择性离子监测／质谱性(GC／SIM／NS)分析CAP残留，灵敏度更高，可达到pg 液—质联用法 LC／MS是一种新的确证方法，不需要衍生化处理，操作简便，灵敏度高。LC／SIM／MS的分析方法，回收率高，检测限低，达到2ng／g以下，有很强的检测和确证能力，目前作为理想的残留确证方法已进入实际应用阶。 酶免疫测定法非常适合对氯霉素残留筛选的需要，它能在短短的几个小时检测几十到上百个试样，也不需要复杂的仪器设备，并有特异性强、灵敏度高、试样预处理简单等优点，它在现场监控和基层实际检测上有着广阔的应用前景。 而高效液相色谱法和气相色谱法具有精确可靠、灵敏度高、重复性好以及假阳性少等优点，只要选择出简单的前处理条件和色谱条件。在氯霉素残留确认工作中，GC/MS 和LC/MS/MS 是首选的方法。 食品中氯霉素残留的检测方法，今后仍采取ELISA试剂盒对样品进行初筛，对阳性或样品用GC/MS 或LC/MS 进行确证。一般来讲，LC/MS 技术确证氯霉素比G C / M S 技术确证迅速，但由于GC/