中山杉407ThP5CS和ThδOAT的克隆及干旱胁迫下-林业科学研究.PDFVIP

林业科学研究　２０１８，３１（４）：１２６ １３４ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　ＤＯＩ：１０．１３２７５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｘｙｊ．２０１８．０４．０１８ 中山杉４０７ＴｈＰ５ＣＳ和 ＴｈＯＡＴ的克隆及 δ 干旱胁迫下的表达分析 １，２ ２ １ １，２ １ １ １ 王芝权 ，喻方圆 ，施　钦 ，殷云龙 ，宣　磊 ，范文才 ，华建峰 （１．江苏省中国科学院植物研究所，江苏 南京　２１００１４；２．南京林业大学林学院，江苏 南京　２１００３７） 摘要：［目的］探究中山杉４０７（Ｔａｘｏｄｉｕｍｍｕｃｒｏｎａｔｕｍ ×Ｔ．ｄｉｓｔｉｃｈｕｍ ）（Ｔ．ｈｙｂｒｉｄ‘Ｚｈｏｎｇｓｈａｎｓｈａｎ４０７’）的 ♀ ♂ ＴｈＰ５ＣＳ和ＴｈＯＡＴ基因与植物耐旱性的关系，为落羽杉属植物抗性育种提供新的基因资源。［方法］利用ＲＡＣＥ技 δ 术从中山杉４０７中分别克隆ＴｈＰ５ＣＳ和ＴｈＯＡＴ基因ｃＤＮＡ全长，通过生物信息学手段分析预测其编码蛋白的结构 δ 和功能。基于干旱－复水试验，采用半定量和实时荧光定量技术研究中山杉４０７ＴｈＰ５ＣＳ和ＴｈＯＡＴ的表达特性。 δ ［结果］从中山杉４０７中克隆了编码Ｐ５ＣＳ和 ＯＡＴ蛋白的基因，分别命名为ＴｈＰ５ＣＳ和ＴｈＯＡＴ，其中，ＴｈＯＡＴ包 δ δ δ 含１个长度为 １４９４ｂｐ的ＯＲＦ，编码４９７个氨基酸，与樟子松（ＰｉｎｕｓｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓＬ．）ＯＡＴ蛋白的序列相似性高达 δ ９２％；ＴｈＰ５ＣＳ包含１个长度为１５４５ｂｐ的ＯＲＦ，编码５１４个氨基酸，与花烛属植物（Ａｎｔｈｕｒｉｕｍａｍｎｉｃｏｌａ）Ｐ５ＣＳ蛋白 的序列相似性为８７％。半定量与定量ＰＣＲ结果一致，在自然干旱和复水环境下，ＴｈＰ５ＣＳ在中山杉４０７及其父本落 羽杉（Ｔ．ｄｉｓｔｉｃｈｕｍ）、母本墨杉（Ｔ．ｍｕｃｒｏｎａｔｕｍ）中均表现为先上调再下调的趋势，而ＴｈＯＡＴ在中山杉４０７及其父 δ 母本中相对表达量则存在差异。［结论］干旱胁迫下，ＴｈＯＡＴ和ＴｈＰ５ＣＳ基因的正反方向调节是中山杉４０７及其亲 δ 本在干旱胁迫与恢复状态下控制脯氨酸水平的关键机制，其中，ＴｈＰ５ＣＳ在中山杉４０７及其亲本脯氨酸的合成过程 中起重要作用。 关键词：中山杉；干旱胁迫；基因表达分析 中图分类号：Ｓ７１８．４６ 文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１１４９８（２０１８）０４０１２６０９ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｈＰ５ＣＳａｎｄＴｈＯＡＴＧｅｎｅ δ ｉｎＴａｘｏｄｉｕｍＨｙｂｒｉｄ‘Ｚｈｏｎｇｓｈａｎｓｈａｎ４０７’ｕｎｄｅｒＤｒｏｕｇｈｔＳｔｒｅｓｓ １，２ ２ １ １，２ １ １ １ ＷＡＮＧＺｈｉｑｕａｎ ，ＹＵＦａｎｇｙｕａｎ，ＳＨＩＱｉｎ，ＹＩＮＹｕｎｌｏｎｇ ，ＸＵＡＮＬｅｉ，ＦＡＮＷｅｎ