氨基酸和蛋白质.pptVIP

* 2 氨基酸的性质 (1) 物理性质： 组成蛋白质的20种α-氨基酸，除甘氨酸外都具有旋光性。 甘氨酸：262℃(分解) 酪氨酸：310℃(分解) α-氨基酸都是高熔点固体，多数在熔化时分解。 (2) 两性和等电点： 氨基酸既能和酸反应生成铵盐，也能和碱反应生成羧酸盐，是两性化合物。 氨基酸在溶液中存在下列平衡： K1 K2 低pH 高pH 氨基酸的等电点用pI表示： 氨基酸所带的正电荷数目与负电荷数目正好相等时的pH值。 关系式：pI = (pK1 + pK2)／2 pK1=2.34 pK2=9.69 丙氨酸 在等电点时，氨基酸几乎全部以两性离子形式存在。 溶液的pHpI时，氨基酸以正离子形式存在； 溶液的pHpI时，氨基酸以负离子形式存在。 处于等电点的氨基酸溶解度最小。 可以通过测定氨基酸的等电点来鉴别氨基酸。 中性氨基酸：pI=6.2~6.8； 分子结构不同的氨基酸，等电点各不相同。 酸性氨基酸：pI=2.8~3.2； 碱性氨基酸：pI=7.6~10.8。 (3) 和亚硝酸反应： 根据放出氮气的量，算出样品中氨基的含量。 (4) 和甲醛反应： 反应产物不能再生成两性离子，因此可以用标准碱溶液来滴定，进行氨基酸的分析。 Van slyke氨基测定法 (5) 烃基化反应： 黄色 用于测定氨基酸在蛋白质中的排列次序。 (6) 酰化反应： 用于在人工合成蛋白质时保护氨基。 (7) 羧基的反应： 氨基酸的羧基，也具有羧基的一般性质，能发生酯化、成酐、成酰胺等反应。 在合成蛋白质时常用于保护羧基。 (8) 茚三酮反应： 水合茚三酮 紫色 可以用于氨基酸的比色测定和纸上层析的显色。 (9) 络合性能： 氨基酸的羧基可以和金属成盐，成盐后氨基上的未共用电子对可以和金属离子形成配位键，从而形成稳定的络合物。 1 肽和肽键 一分子α-氨基酸中的羧基和另一分子α-氨基酸的氨基，通过失水形成酰胺键而连结成的化合物叫做肽。 肽分子中的酰胺键称为肽键。 根据肽分子中氨基酸的数目，称作二肽、三肽…… 青霉素G 半胱氨酸 缬氨酸 15-2 多肽 氨基酸残基 肽键 N-端 C-端 肽链的氨基酸顺序与命名 氮端 碳端 丙氨酰甘氨酰丙氨酸 Ala—Gly—Ala 丙—甘—丙 2 多肽结构的测定 测定多肽的结构，是走向合成蛋白质的第一步，要弄清一个多肽的结构，必须要知道： ①它是由哪些氨基酸组成的， ②这些氨基酸是按什么次序结合的。 多肽分子中氨基酸的排列情况非常复杂，例如由8种氨基酸组成定的八肽就有8! = 40320种排列方式。 (1) 氨基酸组分分析 目的是确定组成多肽的氨基酸的种类和数目。 将多肽在6mol·l-1的HCl中，加热至100℃，维持24小时，使多肽完全水解，然后使水解后获得的氨基酸混合液通过离子交换柱，不同的氨基酸因通过离子交换柱的速度不同而分离，用自动检测仪器鉴定和记录。 氨基酸分析仪 (2) 氨基酸的顺序分析 ①氮端分析：Edman降解法 ②碳端分析：羧肽酶法 羧肽酶A能水解不是精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)的碳端氨基酸，羧肽酶B则只能水解碳端为精氨酸和赖氨酸的多肽。 ③肽链的选择性水解 部分水解法常用的蛋白酶： 胰蛋白酶，只水解羰基属于赖氨酸、精氨酸的肽键； 糜蛋白酶，水解羰基属于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的肽键。 溴化氰，只能断裂羰基属于蛋氨酸的肽键。 最后，把选择性水解得到的各个肽段的分析结果，用重叠法得出整条肽链的氨基酸顺序。 3 多肽的合成 (1) 保护氨基或羧基 (2) 活化反应基团 通常是保护—NH2及—OH、—SH等，活化—COOH。 活化羧基的方法很多，例如用与亚硫酰氯作用将羧基转化为酰氯的方法。 (3) 保护生物活性 合成多肽必须保证氨基酸的排列顺序与天然多肽相同，并与天然多肽不论在物理、化学性质和生物活力各方面都一样，才具有意义。 天然多肽的合成，可证明多肽结构分析结果的正确性，为合成蛋白质打下基础。 (4) 合成方法 溶液法： 需要一个氨基组分和一个羧基组分。 羧基组分 氨基组分 保护氨基 活化羧基 保护羧基 连接 固相法： 1963年Merrifield发明的，以不溶性聚苯乙烯树脂作为载体。 ４ 几种重要的多肽 谷胱甘肽 δ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸 作为还原剂，保护蛋白质或酶的巯基免遭氧化；清除体内的H2O2；保护核酸和蛋白质免遭毒物损害。 催产素 肽类激素 肽链中的二硫键 胰岛素 汪猷 1910-1997 邢其毅 1911-2002 钮经义 1920-1995 1965年9月，中国在世界上首次合成牛胰岛