基于纸微流控分析装置的功能核酸生化分析新方法研究-化学工程专业论文.docxVIP

研究生学位论文独创性声明和l版权使用授权书醋!J性声明本人)kJ所且是OO立是本人在将再拥导rJ!1r罔研究工作Jti(侧的研究蹄.M!.IiIll1.ffl捆，徐T宜J持协j部目标撞事咽剧的地方外.it立斗平包含悔人已经提1!!lijft写茸的研n..且.也才、也舍盐，获得1tB植ff肌肉的学姐姐冒11而fl!甩过的钊H.时论主闹革成她快且幌耻的盯芷人员己在俊立中t1!7明确的现明并夜嘟嘟在.学位地宜作者啤íh_翠J!j)_反，醉Alru，斟吟刽孚A学位论文版叙使用授钗书本节性论宜作者完全了解〈学幢)有芷li!WJ.世础学位茸的规距。何扭恬橱t由闰!!尖1IIlr1!ii盹盹璋吏论立的印刷东和电子版本.血停地主酷由倒和1曲阅.本人接(学挂}可U将嗲阻OJ企修蓝liIJ分内串串自入n提嚣lI?f?蛙衍捡置，可以最1IJ.IIi印、蜻民i蓝担幅鲁，且制芋舷保哥.11:蝇电台阻馆:i(.同时蟹拟同树伊拉求的血研究所将本学?由主喧漠!ll唱·国学位讼宜会直盘醋掌).多事遇坦问鹅向性告仕众提供情血!匾.(辄擎的愤世论立在解您尉届剧本摆摆11)崎主是否附s是d如南回到医.曲在期回J沟，r咄咄{同时，f色，生也JI$nlUJ.仰6Jl日阳擅字丢在乡签字口川岱ρ111动ID功能核酸是指能与高特异性结合特定目标物或具有某些催化功能的一类核酸分子。因具有优异的生物相容性、灵活的信号转导机制且易于合成等优点，近年来基于功能核酸的分子探针研究受到了国内外研究者们的极大关注。大量基于功能核酸的新型生化分析方法与生物传感器件被开发出来。尽管如此，现有绝大部分的这些功能核酸生化分析与生物传感新技术要么不能实现定量分析，要么必须使用价格昂贵的定量分析设备。针对当前功能核酸生物分析方法存在的带共性问题，本论文尝试引入低成本纸微流控分析装置，开展功能核酸免仪器定量分析新方法研究。主要研究内容如下：在第二章中，利用纸微流控分析装置和G-四链体-氯化血红素（hemin）DNA模拟酶，开发了一种简单、低成本的K+免仪器计时定量检测新方法。当样品中存在K+时，富含鸟嘌呤的特定序列单链DNA会发生构象变化形成G-四链体结构，进而与hemin结合生成具有过氧化物酶活性的DNA模拟酶。该模拟酶能够催化H2O2和固定在纸微流控分析装置中的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）之间的反应，在纸中生成大量的疏水性聚合TMB沉积物。不同浓度的K+样品将使得纸装置中TMB固定处生成的疏水性聚合TMB沉积物的产量不同，从而导致滴加在纸装置上的红墨水流经该处到达设定位置所需时间存在差异。通过使用计时器或具有计时功能的手机量测红墨水的流过时间，即可实现样品中K+浓度的免仪器定量分析。结果表明，在优化的实验条件下，新方法对K+检测具有两段线性范围，分别是500nM~25μM和25~200μM。根据3σ规则得到方法的检测下限为490nM。此外，该方法还具有较理想的检测特异性和重现性。将之用于实际人血清样品分析，回收率结果令人满意。在第三章中，利用多通道纸微流控分析装置发展了一种新型的核酸适配体免仪器即时（Point-of-Care，POC）定量分析方法。实验中，协同使用杂交链式反应和酶催化反应作为级联信号放大手段以提高分析灵敏度。通过使用磁分离技术来提高方法的检测特异性。进而，利用酶催化产物H2O2可氧化μPAD中KMnO4（检测试剂）着色印迹使之褪色的反应机制，建立了不需任何电子读取的计数策略用于模型分析物（即腺苷）的肉眼定量检测。实验结果表明，建立的新方法仅要求操作者具有基本的溶液混合、磁分离、颜色辨别和计数能力，即可实现样品中腺苷的免仪器POC定量分析。本研究中腺苷的线性检测浓度范围是1.1μM~17.5mM，检测下限为1.1μM。该方法具有操作简单、成本低廉、分析灵敏/特异、便携性好等突出优点，为发展核酸适配体POC定量分析技术提供了一个有效的新思路。关键词：功能核酸；纸微流控分析装置；G-四链体；核酸适配体；免仪器定量分析；IVFunctionalnucleicacidreferstoaclassofnucleicacidmolecuesthatcanspecificallybindanalytesofinterestorhaveauniquecatalyticability.Duetheiravantagesofexcellentbiocompatibility,flexibledesignsofsignaltransductionmechanismsandeaseofsynthesis,etc.,inrecentyearsthefunctionalnucleicacid-basedmolecularprobehasattractedincreasingattention.Ag