NovoRecPlusPCR一步定向克隆试剂盒.PDF

NovoRec® Plus PCR 一步定向克隆试剂盒 产品说明书及技术手册 目录 A. NovoRec® Plus PCR 一步定向克隆试剂盒产品说明书3 B. 技术手册8 1.引物设计- 8 - 1.1. 多片段引物设计方法 - 8 - 1.2. 载体或目的片段末端上有多余非同源片段时如何设计引物？ - 8 - 2.重组构建- 8 - 2.1. 目的片段与载体摩尔比的计算- 8 - 2.2. 线性化载体的浓度- 9 - 2.3. 可以插入小片段吗？- 9 - 2.4. 如果载体过大，怎么处理？- 9 - 2.5. 插入片段过大要如何处理？- 9 - 2.6. 单酶切（黏性末端、平末端）处理的载体片段，是否影响阳性率？- 9 - 2.7. 一个反应最多可组装几个片段？- 9 - 2.8. 引物的同源臂长度为多少合适？- 9 - 2.9. 反应在其他温度下会起作用吗？- 10 - 3.常见困难分析- 10 - 3.1. Taq DNA 聚合酶扩增后末端加A 影响重组效率吗？- 10 - 3.2. 同源序列不完全匹配会不会影响重组效率？- 10 - 3.3. 转化不长，是什么原因？- 10 - 3.4. 转化后克隆在板上长得很好，就是没有阳性，是什么原因？- 10 - 3.5. 鉴定有阳性，但是测序不是目的基因，为什么？- 10 - 3.6. 阳性克隆测序后发现在序列的引物处有碱基突变，是什么原因引起的？- 11 - - 2 - Website: Tel: (021) 5079-8060 NovoRec® Plus PCR 一步定向克隆试剂盒 一、 产品介绍 一步定向克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的多片段DNA 定向克隆产品，可以不依 赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，直接用同源重组的方法将PCR 产物定 向克隆至任意载体的任意位点，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简 单，PCR 产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至10 分钟，阳性率达 到95% 以上，让您轻松完成实验。 二、 反应原理 三、 产品组成及保存条件 3.1.产品组成 产品组成 A 包装规格（20 次） B 包装规格（100 次） NovoRec® Plus 重组酶 20μl/管 100μl/管 5 ×反应缓冲液 100μl/管 500μl/管 NovoRec® pUC19 线性化预处理载体，50ng/μl 20μl /管 20μl/管 800bp PCR 片段（阳性对照），50ng/μl 20μl /管 20μl/管 Novoprotein 2×SpecificTMTaq Master Mix 1ml 1ml×5 3.2.保存条件 收到后请立即低速离心保存在-20 ℃；此Kit 可在-20 ℃长期保存，