微量血浆血清miRNA提取试剂盒.DOCVIP

微量血浆（血清）miRNA提取试剂盒（磁珠法） 使用说明书（Cat#Yu-Mi02-2） 【产品介绍】 miRNA是一类长约19~24nt的非编码单链小RNA 分子，在动物中绝大多数miRNA 可以通过与靶基因3′UTR 区互补结合，抑制靶基因翻译成蛋白质，进而在细胞、组织或个体水平上影响生物体的生长发育，并参与多种疾病过程。一系列的研究表明miRNA在细胞生长和凋亡、血细胞分化、同源异形盒基因调节、神经元的极性、胰岛素分泌、大脑形态形成、心脏发生、胚胎发育和脂肪代谢等过程中发挥重要作用。 随着血浆（血清）miRNA在临床上的广泛应用，miRNA的提取就显得越来越重要。miRNA在正常人的血液中含量甚微，能否获得高质量的miRNA是 进行分子生物学研究的第一步，也是关键的一步，直接影响实验成败。 微量血浆（血清）miRNA提取试剂盒（磁珠法）采用本公司的专利技术，有效的提高了磁珠对miRNA的吸附效率，可以从少量血浆（血清）、体液中分离纯化出高质量、高浓度的miRNA。本产品性能优良，结果可靠，安全无污染，打破了国外的垄断。 【产品特点】 1. 效率高：本产品操作简便，可自动化。提取的游离核酸质量好、浓度高，cfDNA的提取效率可与国外同类产品相媲美，miRNA的提取效率明显高于国外产品（图1）。结合本公司的Taqman-MGB探针荧光定量PCR试剂盒（Cat#Yu-R01-1）和miRNA逆转录试剂盒（Cat#Yu-RR01-1），可获得完美的miRNA检测效果。 2. 提取的核酸可直接用于PCR扩增、分子杂交和测序（NGS）等各种分子生物学实验。 3. 本产品适用于从人或动物血浆（血清）、体液中提取纯化miRNA。 4. 本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，安全无化学污染。 图1本产品提取的血浆miRNA浓度分析结果与Qiagen miRNA提取试剂的比较。 【试剂盒组成】 试剂盒组成 数量 保存条件 裂解吸附液A 28mL×1瓶 室温避光保存 Carrier RNA 50μL×1支 -20℃保存 磁珠 0.5mL×1支 4℃保存 Buffer AW1 12mL×1瓶 室温避光保存 Buffer AW2 9mL×1瓶 室温保存 PBS缓冲液 7mL×1瓶 室温保存 洗脱液A 3mL×1瓶 室温保存 使用说明书 1份 【规格】50T/盒 【贮藏与有效期】 裂解吸附液A和Buffer AW1必须室温（15-25℃）避光保存；Carrier RNA-20℃保存；磁珠4℃保存；其它试剂室温保存；有效期为1年。 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇。 【注意事项】 使用前务必认真阅读以下注意事项。 1、Buffer AW1使用前，加入18mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前，加入21mL无水乙醇，使乙醇含量为70%。 3、提高洗脱温度或重复洗脱可以提高产量。洗脱液的使用量太少会影响洗脱效果。★ 【操作步骤】 1、裂解吸附液B的配制： 使用前按标本数吸取相应体积的裂解吸附液A，血浆（血清）样本按每560μL裂解吸附液A中加入1μL Carrier RNA，配成裂解吸附液B。 2、样本处理 取新鲜EDTA抗凝血（已析出血清的不抗凝血或体液），1900×g离心10分钟，吸取上清；上清16,000×g离心10分钟。 3、在1.5mL EP管中加入140μL样品和560μL裂解吸附液B，混匀，室温放置10分钟，中间振摇2次。 4、取出EP管，加入560μL异丙醇和10μL磁珠，室温3000rmp振摇10分钟。 5、将EP管放于磁力架上，吸附磁珠至液体清澈。（此过程中，颠倒磁力架数次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收）。 磁珠吸附的快慢与磁力强弱有关，一般吸附时间为5-10分钟。为了使磁珠充分回收，可以增加吸附时间。 6、 在磁力架上，吸弃EP管中液体（需吸干EP管底和管盖中的残留液体）。 7、加入600μL Buffer AW1，从磁力架上取下EP管，充分混匀后放回磁力架，吸附磁珠2分钟（此过程中，颠倒磁力架数次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收），回收磁珠，弃上清。 8、加入600μL Buffer AW2，从磁力架上取下EP管，充分混匀后放回磁力架，吸附磁珠2分钟（此过程中，颠倒磁力架数次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收），回收磁珠，弃上清。 9、加入600μL无水乙醇，从磁力架上取下EP管，充分混匀后放回磁力架，吸附磁珠2分钟（此过程中，颠倒磁力架数次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收），回收磁珠，弃上清（需吸干EP管底和管盖中的残留液体）。 10、37℃晾干3分钟。 11、在EP管中加入20μL 洗脱液A，混匀后