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2×Taq PCR Master Mix 含染料 PT102-01 PT102-02 2×Taq PCR Master Mix 1 ml 5×1 ml diH2O 1 ml 5 ml 不含染料 PT103-01 PT103-02 2×Taq PCR Master Mix 1 ml 5×1 ml diH2O 1 ml 5 ml ●储存条件 -20°C长期保存；反复冻融16次不影响使用效果；如果频繁使用，建议储存于4 上海莱枫生物科技有限公司 电话：021 传真：021技术支持●产品简介 2×Taq PCR Master Mix是一种优化的两倍浓度的PCR预混合液。适合用于常规PCR，可以从复杂基因组DNA中扩增出长达4 kb的片段或者从λ DNA中扩增出长达5 kb的片段。 PCR增强剂和蛋白稳定剂协同提高了PCR效率和灵敏度，非常适合低拷贝模板扩增。 产品使用方便，只需要取0.5倍PCR体系体积的 2×Taq PCR Master Mix，加入引物和模板，以diH2O补足体积即可，大大减少了加样误差。产品分为含染料 (目录号：PT102)和不含染料(目录号：PT103)两种，含染料的产品反应结束后可以直接电泳。 ●产品主要成分 0.1 U/μl Taq DNA Polymerase 0.4 mM each dNTPs 2×Taq Buffer 红色和黄色两种指示染料(目录号：PT102) PCR增强剂和蛋白稳定剂 △Taq DNA Polymerase 重组的耐热的DNA聚合酶，具有5′→3′的聚合酶活性和双链5′→3′的外切酶活性，产物为3′单个A粘性末端。 △2×Taq Buffer 2×Taq Buffer含KCl，(NH4)2SO4，3mM MgCl2，Tris-HCl，pH 8.3(25°C) △指示染料 目录号：PT102含红色和黄色两种电泳指示染料。两者不会抑制PCR，也不会抑制酶切和连接等下游酶反应，不会影响EB显色，其电泳相对迁移距离见表1： 表1：琼脂糖凝胶浓度与染料相对迁距离 凝胶浓度 红色染料 黄色染料 0.8% 2000bp ~80 bp 1.0% 1500bp ~40 bp 1.5% 1000bp ~20 bp 2.0% 500bp 10 bp 2.5% 350bp 10 bp 3.0% 200bp 10 bp 染料会干扰OD检测。如果PCR产物不做纯化而直接检测OD，请使用目录号：PT103。 ●质量控制 经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因。 ●PCR体系成分 △模板DNA的纯度 很多残留的核酸提取试剂会影响PCR反应，包括蛋白酶、蛋白变性剂(比如SDS、胍盐)、高浓度盐(KAc、NaAc、辛酸钠等)和高浓度EDTA等。这些杂质可通过乙醇或异丙醇沉淀后用66-70%乙醇洗涤两次去除，大部分商品化的核酸纯化试剂盒可有效去除这些杂质。 cDNA作为模板时，应考虑模板中高浓度盐离子(尤其是Mg2+)；PCR产物作为模板还需考虑DNA含量(参考△模板DNA用量)。 高纯度、高浓度的DNA作为PCR模板是最理想的。高浓度DNA可通过稀释减少干扰PCR的成分。 △模板DNA用量 极微量的样品可以作为PCR摸板，但为保证反应的灵敏性，25μl体系使用104拷贝的靶序列作为模板；可参考表2计算需加入PCR体系的模板量。 表2：1 μg各种来源的DNA对应的摩尔数 1 μg DNA mol 1 kb线性双链DNA 9.18×1011 3 kb质粒DNA 2.9×1010 Lambda (λ) DNA 1.9×1010 E.coli基因组DNA 2.0×108 人类基因组DNA 3.0×105 例如：纯化的人类基因组DNA浓度为1 μg/μl，某基因在人类基因组中拷贝数为10，其单位体积拷贝数为： 3.0×105 mol/μg × 1 μg/μl × 10 copy/mol =3.0×106 copy/μl 1×104 copy/ (3.0×106 copy/μl) = 1/300 μl 即：1/300 μl浓度为1 μg/μl的人类基因组DNA中含104拷贝该基因，稀释300倍后加1 μl至25 μl PCR体系。 为保证反应的特异性，DNA终浓度应小于10 ng/μl，过多的DNA可能会出现涂抹带甚至无特异性条带。 一些特定的模板可参考表3决定模板量。 表3：25 μl PCR体系特定模板用量 特定模板 25 μl PCR体系用量 cDNA 2.5 μl (10%PCR体系体积) PCR产物 用TE＃稀释100~1000倍后，1 μl 菌液 用TE＃稀释100~1000倍后，1 μl 菌