19 第十九章基因工程原理教材编辑.pptVIP

第十九章 基因工程;基因工程 工具酶和DNA加工 基因克隆载体 目的基因及导入 克隆子的筛选和鉴定 研究进展与应用;基因：是具有遗传功能的 DNA片段。基因组，某一个生物体染色体上的全部基因，包含生物体的全部遗传信息 基因工程：有目的地将某一生物体的遗传信息在体外经人工与载体相接，构成重组DNA分子，然后转入另一生物体细胞中，使被引进的外源DNA片段在后者内部得以表达和遗传。 目　的：物种自然进化的速度太慢（自然条件下的进化力：基因突变、基因转移和基因重组等）。通过基因工程人为地极大提高生物体的进化速度，创造人类所需要的生物体（物种、生物学性能、蛋白质、酶、药物、化合物）;生物化学 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 Gene Eng;基因工程的关键：DNA 的连接重组 必要性：DNA的连接之前必须进行加工－－将 DNA分子切割成所需的片段，同时将克隆载体进行相同的切割，以便于相互连接；可能还需对片段进行修饰。 DNA的切割方式： 物理破碎：针头拍打或超声波破碎成大约0.3-0.5 kb 碎片，缺点：随机切断DNA，不能重复。 限制性内切酶：1960’s，工具酶的发现，;（1）Restrictive enzyme;生物化学 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 Gene Eng;I、限制性内切酶的命名;II、限制性内切酶的切割特点;生物化学 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 Gene Eng; 5’-CTGCAG-3’ Pst I 5’-CTGCA-OH3’ + 5’P-G-3’ 3’-GACGTC-5’ 3’-G-P5’ + 3OH- ACGTC-5’;生物化学 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 Gene Eng;? 识别位点 识别位点?  —C T C G A A G C T T G T T C— —G G C A A G C T T A C T— —G A G C T T C G A A C A A G— —C C G T T C G A A T G A— 　Hind III 酶解 Hind III 酶解? ?  —CTCGA-OH P-AGCTTGTTC— —GGCA-OH P- AGCTTACT— —GAGCTTCGA-P HO-ACAAG— —CCGTTCGA-P HO-ATGA— 混合、退火 ? —GGCAAGCTTGTTC— —CCGTTCGAACAAG—;—A A G G C C G G G T C G— —G G A G G T T A A C C T— —T T C G G G C C C A G C— —C C T C C A A T T G G A— Sma I 酶解 Hpa I 酶解? ?  —AAGCCC-OH P-GGGTCG— —GGAGGTT-OH P-AACCT— —TTCGGG-P HO-CCCAGC— —CCTCCAA-P HO-TTGGA— 　　混合、退火 ? ? —GGAGGTT GGGTCG— —CCTCCAA CCCAGC—; 能催化两个DNA片段末端之间5’-P基团和3’-OH形成磷酸二酯键，使两末端连接 E.coli DNA连接酶：由大肠杆菌基因组编码，反应中需供给 NAD+，只能连接具互补粘性末端的 DNA片段 T4DNA连接酶：由T4噬菌体编码的，反应需ATP供能，能连接具互补粘性末端的DNA片段、不同