大肠菌群检测操作规范培训教材.pptVIP

5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （二）活性乳酸菌饮料系列产品 活性乳酸菌饮料系列产品接种双料乳糖胆盐发酵培养基3支管，单料乳糖胆盐发酵培养基6支，分别接种样品量为10ml 3支，1ml 3支，0.1ml 3支。 1、 10ml接种培养 在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时用10ml灭菌吸管分别吸取10ml样品试液于3支双料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 2、 1ml接种培养 另用1ml灭菌移液管分别吸取1ml 样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 3、 0.1ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml 1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 4、接种过程操作录像检测\双料大肠检测.MPG 讨论 录像中存在的细节问题： 1、整个微生物检测前应先消毒手。 2、为了尽量减少污染，接种培养时先接生理盐水管再接乳糖胆盐发酵管。 3、拿刻度吸管时，注意用手托住吸管筒轻轻抖出。 4、先熄灭酒精灯再擦拭操作台和酒精灯。 5、剪刀用完后及时的进行擦拭干净。 5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （三）证实试验 1、伊红美蓝琼脂平板分离 将产酸产气乳糖胆盐发酵管内的培养物分别接种于伊红美兰琼脂平板(划线分离)，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h。 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 平板分离画线法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 将伊红美蓝琼脂平板从培养箱取出后,观察菌落形态，并做革兰氏染色和乳糖复发酵试验。 革兰氏染色：见《革兰氏染色及镜检操作规范》。 （四）乳糖发酵试验 挑取可疑菌落进行革兰氏染色后接种乳糖发酵培养基，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察产气情况。 凡是革兰氏阴性无芽孢杆菌乳糖发酵管产酸产气的菌落即可报告大肠菌群阳性。 根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，查找每100ml样品内的大肠菌群的MPN值。 七、MPN单位介绍 MPN=Most Probable Number ，最大可能数 ，是一种利用统计学检测微生物的方法。 食品大肠菌群是以每克或100ML中大肠菌群的最近似值，是用MPN来表示。 采用9管法，对样品选三个稀释度，每个稀释度接种三管相应的培养基进行培养，然后根据情况做出判断阳性和阴性，再根据不同稀释度的阳性管数查表即可得到被测样品相应指标的MPN值。 八、注意事项 乳糖胆盐发酵管内小导管内如无气泡，需轻振试管，若有气泡上冒，也算产气。 在伊红美蓝琼脂平板上的菌落如为深紫色有金属光泽，则为典型菌落，98%以上为大肠菌群。 革兰氏染色和乳糖复发酵时如有典型菌落，则挑取典型菌落；无典型菌落，应挑取红色和粉色菌落。 如果只有红色或粉色菌落，应挑取3个进行革兰氏染色，并接种乳糖发酵培养基。 如果有红色和粉色菌落，则各挑取3个做革兰氏染色，各挑取3个接种乳糖发酵培养基混合接种。 大肠杆菌接种培养流程 1、用酒精棉球擦拭操作台，点酒精灯，消毒手，擦拭样品表面并记录，消毒手，消毒剪刀，剪开样品袋。 2、接种培养时，先接生理水管，再接乳糖胆盐发酵管。双料的先接生理盐水管，接1ml原样，再接10ml 的原样。 3、操作完后，先熄灭酒精灯再消毒操作台和擦拭酒精灯外周。 2019 ppt资料 * 欢迎批评指导！！ 快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！ 大肠菌群检测操作规范培训 质量管理部 目录 一、细菌介绍 二、大肠杆菌生物学特性 三、大肠杆菌检测仪器、设备 四、检测培养基及试剂 五、检测前培养基准备 六、接种培养 七、MPN单位介绍 八、检测注意事项 一、细菌介绍 细菌是单细胞原核微生物，个体微小（细胞直径约0.5μm, 0.5-5μm），结构简单，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。 1、细菌的形态 细菌个体微小、形态各异 球菌 杆菌 弧菌与弯曲菌 螺旋菌及螺旋体 不规则形 弧菌 2、细菌的结构 细菌的基本结构包括：细胞壁、 细胞膜、间体、细胞浆、核糖体、细胞质。 细菌的附属结构包括：质粒、荚膜