植物细胞工程.docVIP

植物细胞中药物的产品化制造 植物中提取药物意义 人类从植物中得到药物已有很长的历史。利用植物细胞培养可大量生产经济价值较高的植物有效成分,也可生产人活性因子、疫苗等重组DNA产品。植物细胞培养不受地理和气候条件的影响,次级代谢产物含量很高。如人参皂苷在组织培养中含量占干重的27%,全株中只有4.5%;紫草素在细胞培养物中占12%,而全株只有1.5%。药用植物三七、人参等的培养已进行了系统研究,并优化了培养条件。人参细胞培养物的化学成分和药理活性分析表明与种植人参无明显差异。一些植物的细胞培养已达到商业化生产应用,如在日本植物细胞培养反应器的规模已达 4000L～ 20000L,美国Phyto公司已达到75000L紫杉醇的生产规模。 随着植物细胞培养、植物基因工程等生物技术的发展, 它被赋予了新的内容和广阔的发展前景。从药用植物中直接提取药有效成分是生产药物的一种主要方法。现许多中成药都是通过这种方法进行生产的。通过对药用植物的化学组成成分分析, 找出所含的可能有效成分, 经过生物学、药理药效验证, 确定出真正的有效成分,还可通过质谱分析、核磁共振等分析, 进一步确定此成分的分子结构和光学特征。提取工艺过程可按所取物质的各种化学物理特性进行分析设计。提取分离技术传统的有过滤、离心、淬取、蒸馏、各式色谱、电泳等方法。从植物中提取药物虽然简单, 但只适宜易栽培、繁殖快的植物, 而对生长周期长、不易栽培、含量少的植物, 如红豆杉, 用直接提取来生产紫杉醇会造成对红豆杉树种毁灭性的破坏。特别如今环境资源日益匮乏,环保意识日益深入, 此法也受到越来越大的限制。 大规模植物细胞培养生产药用成分 植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系, 通过现代生物工程手段进行工业规模生产, 以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。首次提出从植物细胞培养物中合成天然药物的是1956 年美国的Routier 和Nickell, 1967 年Kaul 和Staba 采用多升发酵罐对小阿米( Ammi visnaga) 进行了细胞大量培养的研究, 并首次用此方法得到了药用成分呋喃色酮( Visnagin) 。七八十年代, 植物组织培养、植物原生质体培养等各种植物培养技术与植物细胞培养技术共同发展, 在培养基配方、环境条件控制、悬浮培养技术等研究方面相互借鉴、相互促进; 而大规模培养技术方面, 得益于微生物发酵技术的飞速发展, 各种各样的反应器如气升式、气泡柱式、模式等反应器相继得到应用, 使得植物细胞大量培养的研究迅速得到借鉴发展。这些年来植物细胞培养技术主要致力于高产细胞株选育方法、悬浮培养技术、多级培养和固定化细胞技术、培养工艺优化控制、生物反应器研制、下游纯化技术等方面的研究, 并取得了较大进展。 近几年有些技术用于植物细胞培养对提高产物含量, 降低成本有一定的作用。这些技术有: ( 1) 发状根培养技术和冠瘿组织细胞培养技术。发状根( Hairy root ) 和冠瘿组织( Crown gall t issue) 在离体培养时都具有激素自主、增殖较常规细胞培养快、次生代谢物含量一般比悬浮培养细胞高、且能合成某些悬浮培养细胞不能合成的次生代谢物以及能引入外源基因表达等特点, 从而引起人们利用它们生产药用次生代谢物的重视。如利用桔味薄荷( Mentha citrata) 冠瘿细胞生产萜烯, 洋地黄( Digitalis) 冠瘿细胞生产强心甙,丹参冠瘿细胞生产丹参酮, 长春花冠瘿细胞生产吲哚生物碱 , 人参发状根培养生产人参皂甙, 长春花发状根培养生产长春碱, 青蒿发状根培养生产青蒿素 , 萝芙木发状根培养生产生物碱等等。 ( 2) 两相培养技术 。两相培养技术是在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物, 或者是具有吸附作用的多聚化合物( 如大孔树脂等) , 使培养体系形成上、下两相, 细胞在水相中生长与合成次生物质, 然后分泌出来转移到有机相中。这样不仅减少了产物的反馈抑制作用, 使产物含量提高, 而且通过有机相的不断回收及循环使用, 有可能实现植物细胞的连续培养, 使成本降低。不少植物培养细胞已成功地建立了两相培养系统, 如Payne 等在培养的长春花细胞中加入XAD- 7 大孔吸附树脂, 可以使吲哚生物碱的含量提高; 在培养的花菱草悬浮细胞中加入一种液体硅胶, 可使血根碱的含量大大提高。大规模植物细胞培养技术经过几十年的努力研究, 已取得很大的进展, 有些药用植物种类已实现工业化生产, 如从希腊毛地黄( Digitalis lanata) 细胞培养物通过生物转化生产地高辛( Digoxin) 、从日本黄连( Coptis japonica ) 细胞培养物中生产黄连碱( Copt isine) 、从人参根细胞中生产人参皂甙等; 相当种类的药用植物细