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DNA遗传标记 特点：1.直接反映基因特征，非推测。 2.基因座位数量多，无论表达与否。 3.多态性程度高，等位基因多，鉴别能力 强。 4.适合于陈旧的样品，检测能力强。 5.灵敏度高，有利于微量样品的检测。 6.易于检测手段的自动化、标准化，重复 性好。逐渐取代了蛋白质水平的检测方 法。 第一部 DNA基础 一、DNA结构与特征 1.DNA分子结构 线性大分子-基本单位为脱氧核苷酸 组成----碱基、脱氧核糖、磷酸 差别----碱基：嘌呤碱—腺嘌呤（A）与鸟嘌呤（G） 嘧啶碱—胞嘧啶（C）与胸腺嘧啶（T） 结构：碱基+脱氧核糖=脱氧核苷-+磷酸=脱氧核苷酸 2. DNA理化性质1）?DNA的变性 变性（denaturation）:在一定条件下，DNA双链间氢键断 裂，形成单链结构的过程。也称退火（annealing）。 条件：A：温度上升----Tm值(melting temperature) 50%DNA分子解链的温度。 与GC/TA比值有关。1%GC-0.4℃。 B：碱性升高--- 0.5N NaOH-完全解链。2） DNA的复性 复性（renaturation）撤除变性条件后，变性的单链DNA根据碱基互补的原则，恢复成DNA双链的过程。 条件：A：温度降低—过低易错配。过高不易复性。 B：高离子强度。3） DNA分子杂交 杂交（hybridization）：来源不同的两条DNA单链根据 碱基互补的原则，形成双链杂种DNA的过程。二、基因 1. 基因与基因组 基因（gene）：合成有功能的蛋白质多肽链 或RNA所需的全部核苷酸序列 基因组（genome）：一个生物体的所有基因。 核基因组：细胞核中23对染色体包含的所有基因 线粒体基因组：线粒体DNA中的所有基因 2.? 基因结构 结构基因：能够编码产生蛋白质产物的基因。 外显子（exon）：编码序列。 内含子(intron)：非编码序列（间隔列）。 如β珠蛋白-1700碱基（bp），编码146个氨 基酸，3个外显子，2个内含子。3. 基因突变 突变（mutation）：DNA分子中的核苷酸序列的改变。 1）点突变（point mutation）：单碱基置换。 同义突变（same sense mutation）: 简并密码，无突变效应。 错义突变(missense mutation)：新密码子，氨基酸序列变化，产生突变效应。 无义突变(non- sense mutation)：变成终止密码，合成不完整多肽产生突变效应。 终止密码突变（terminator codon mutation)：合成过长的多肽，产生突变效应。 移码突变（frame-shift mutation)：DNA链中插入1个或几个单碱对，使突变处以下部位密码发生变化，使合成的氨基酸种类或序列变化，产生突变效应。 2）片段突变：DNA链中小片段单碱序列发生缺失、重复或 重排，产生突变效应。 单碱基突变(图中用黑点示意位置为突变点)三、DNA多态性的分类 1）长度多态性：等位基因片段长度的个体差 别。由一特定序列，首尾相连串联 重复次数不同产生的个体差别。 可变数目串联重复（variable number of tandem repeat,VNTR） 短串联重复(short tandem repeat,STR) A：产生原因：DNA滑动与同源染色体 不等交换。 B：差别：VNTR STR 重复序列组成 2-7 bp 7-数十bp 重复序列数目 2-10数个 10数个-数百个 鉴别能力 高 极高 优势扩增现象 不明显 极明显 检测灵敏度 极高 稍差 片段总长度 200-500 bp数千以上bpC：STR的命名： 非编码区-D3S1358 D3 第三号染色体 S单拷贝（single copy） 1358? VNTR序列的发现序号 编码区内含子-HumHPRTB 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因 （ hypoxanthine phosphoribosyl transferase） 1）序列多态性：DNA片段碱基排列顺序的个体差别。 单核苷酸多态性 （single ucleotidepolymorphism,SNPs） 原因：碱基的置换、插入、缺失。 特点：多位于非编码区，选择压力。 数量多，1/1000 bp，300万 二态性，2个等位基因，多态性 程度较低。 孤立事件，人类遗传学意义大。 第二部分 DNA的制备 核心与关键 脑肺肌肉肾 6pg/细胞一、? 理想DNA样品的