【生物化学】第十四篇 基因工程及其在医学中的应用.pptVIP

（一）目的基因的获得 1. 化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 多利诞生过程 （三）印迹技术的类别及应用 1、DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 2、RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 3、蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 分子杂交实验 ① ② ③ 二、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) PCR的基本反应步骤 变性 95?C 延伸 72?C 退火 Tm-5?C 95?C 55?C 72?C PCR的主要用途 （一）目的基因的克隆 （二）基因的体外突变 （三）DNA和RNA的微量分析 （四）DNA序列测定 （五）测定基因的表达水平 三、DNA的序列分析 放射自显影 凝胶电泳 碱性专一性裂解反应 A/G G C/T C 5’GTCGTAA 5’GTCGTA 5’GTCGT 5’G