造血调控.pptVIP

第四节 造血干／祖细胞体外培养技术 体内造血干／祖细胞在一个极复杂的造血微环境中增殖、分化生成血液细胞。 体外造血祖细胞培养就是在体外模拟体内的生理环境，将从机体中分离出的造血祖细胞进行培养，使之生存、增殖分化。 一、造血干／祖细胞体外培养的基本条件 （一）细胞培养室条件 （二）培养的支持物 （三）营养液 （四）细胞因子 （五）血清 二、造血干／祖细胞体外培养方法 （一）造血祖细胞集落培养： （1）分离培养细胞，制成单个核细胞悬液。 （2）配制培养体系：按比例将培养液、细胞、血清、细 胞因子加入到培养体系，混匀。 （3）将配制的培养体系在37℃水浴中保温10min。 （4）将琼脂等支持物煮沸融化（甲基纤维素不需加热）。 （5）待支持物降至40℃左右，加入培养体系并混匀。 （6）将混匀后的培养体系加入培养皿或培养板孔内， 一般平行做3份。 （7）于5% CO2、饱和湿度及37℃温箱内孵育。BFU-E 需14天，CFU-E需7天。 （8）观察结果。 红细胞爆式集落形成单位 （BFU-E） 红细胞的祖细胞体外培养 红细胞集落形成单位 (CFU-E) （二）红系祖细胞诱导分化的液体培养： Medium FBS EPO Stem cell factor IL3