利用无菌柞蚕蛹培育蛹虫草的探究.pdfVIP

2017(2) 龟固苗 爨d栽ib培}e_f技un术gi鬟 利用无菌柞蚕蛹培育蛹虫草的研究 王 张 孙永健1 华1 郭 森2黄登禹1 博1 荣志靖’ (1天津天狮学院生物与食品工程学院，天津301700；2天津市食品研究所有限公司，天津301609) 摘要研究对现有利用柞蚕蛹培育蛹虫草的技术进 可以为蛹虫草的人工培育开辟一条新途径。 行了探讨及改进，通过单因素试验，比较了不同的前处 理及接种方法。结果表明，通过高温高压法对柞蚕蛹灭 1材料与方法 菌，并以浸泡的方式进行接种，可以将蛹体完全僵化所 1．1试剂与仪器新洁尔灭、升汞为北京华威锐科 需时间缩短至8d，僵化率及发草率可提高至100％。利 化工有限公司生产；虫草素标准品为Sigma公司生 用正交试验设计进一步优化，结果表明，在栽培种的液 产；甲醇为色谱纯，购自上海泰瑞尔化学有限公司； 体培养基中，按50％的比例添加柞蚕蛹浸提液，在115℃ 磷酸二氢钾、硫酸镁等化学试剂均为分析纯，购自 的温度下对柞蚕蛹进行高温高压灭菌，以将蛹体浸泡于 栽培用菌液中10s的方式来接种，为较优方案，所得柞 武汉易泰科技有限公司；新鲜滞育柞蚕蛹为市场采 蚕蛹虫草复合体中虫草素含量可达0．296％。主次因素 购，蛹虫草菌种为天津市工业微生物研究所提供。 排序为灭菌温度浸提液含量浸泡时间。研究成果的 应用可以为优质蛹虫草的快速生产，开辟一条新途径。 培养振荡器，上海圣科仪器设备有限公司生产；MJ一 关键词无菌柞蚕蛹蛹虫草高效液相色谱 78A型高压蒸汽灭菌锅，上海巴玖实业有限公司生 文章编号1000—8357(2017)02—0045—04产；RZ一2D2G型双人桌面(水平)净化工作台，广州 瑞智净化设备有限公司生产；EssentiaLC一15C型高 蛹虫草[Cordycepsmilitaris(L．)Link]又名北冬虫 夏草，是蛹虫草真菌寄生在鳞翅目昆虫蛹上形成的 效液相色谱仪，岛津(中国)公司生产。 子座与蛹的复合体，在我国主要分布于辽宁、内蒙 1．2试验方法 古、吉林等地f-叫。蛹虫草富含虫草素、虫草酸、虫草 1．2．1栽培种的培养称取300g马铃薯，去皮切成 多糖等多种生物活性成分，具有抗炎、抗肿瘤、抗衰 小块，加适量蒸馏水煮沸30rain，用四层纱布过滤取 滤液。向滤液中加入1．5 老等功效，药理作用广泛，药用价值较高14～I。目前， g硫酸镁、3g磷酸二氢钾、 利用昆虫蛹或幼虫培育蛹虫草的方法主要有两种， 10 g葡萄糖，用蒸馏水定容至 mg维生素B1、20 1000 一种是通过喂食、喷洒、或与蛹虫草菌丝体共培养 mL。将液体培养基分装于8个200mL锥形瓶 的自然感染法，该方法操作简便，但成功率低且耗 中，每瓶加人20粒0．6cm的玻璃珠，于121℃下灭菌 时较长；另外一种是通过注射、穿刺等方法，人为提 20min。灭菌完毕的培养基放人培养室，于22％下 高蛹虫草菌感染蛹体效率的人工感染法，相较予自 预培养3d，确认培养基没有被杂菌污染，便可进行 然感染法来说，人为干预可以较大地提高