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食用菌学报⑥2013．20(3)：1～5
文章编号：1005—9873(2013)03—0001—05
刺芹侧耳与秀珍菇细胞融合及融合子的鉴定
张鹏1，龚玲凤2，朱坚2。’，庄卫东1，郑金水1，林金1
(1泉州农业科学研究所，福建泉州362212；2福建农林大学菌物研究中心，福建福州350002；
3福建农林大学园艺学院，福建福州350002)
摘 要：以刺芹侧耳(Pleurotus geesteranus)单孢菌株
eryngii)双核菌株p1．e0091和秀珍菇(Pleurotus
min热灭活后与p1．90001．．1原生
p1．90001．．1为亲本，分别制备原生质体，p1．e0091原生质体50℃水浴20
min)，通过锁状联合和拮抗试验得到1株融合子，经
质体融合(25％PEG融合剂、pH=8、30℃水浴下融合20
RAPD、ISSR分子标记证明融合子含有双亲遗传物质。
关键词：刺芹侧耳；秀珍菇；原生质体融合；分子标记
食用菌原生质体融合育种技术早已应用到
1材料与方法
了食用菌的品种选育和菌株改良上，原生质体融
合育种与常规育种相比有其显著优点，即克服生 1．1供试菌株
物种的障碍，实现远缘杂交。近年来，国内许多 刺芹侧耳双核菌株p1．e0091(优质高产菌
研究者通过研究试验已获得了食用菌种内、种 株)及秀珍菇单孢菌株p1．90001．．1(菌丝生长速
间、属间，甚至科间原生质体融合子[1’6]。在细胞 度快)，由福建农林大学菌物研究中心提供。
1．2试剂
融合育种过程中，快速准确地鉴定融合子是后续
融合剂含25％PEG(m／v)、100mmol／L
工作的基础。
CaCl2·H20、0．6 8．0。
mol／L甘露醇，pH
分子标记基于染色体上的DNA，因此不易
稳渗剂：0．6mol／L甘露醇。
受外界环境及自身发育水平的影响，目前已广
酶液：溶壁酶(广东省微生物研究所)用稳渗
泛应用于食药用菌的种质鉴定、遗传多样性分
剂配制成20mg／mL的溶液，细菌过滤器过滤，
析、系统发育、分子标记辅助育种等各个领
用时现配。
域Ⅲ5|。RAPD(random
amplifiedpolymorphic
再生培养基：稳渗剂配制的PDA培养基。
DNA)、ISSR(inter．simplesequencerepeat)是基
1．3主要仪器
于PCR技术的分子标记技术，都在食用菌杂交
PCR扩增仪：宝生物工程(大连)有限公司梯
种的鉴定和不同菌种的遗传背景分析中得到广
度PCR仪；
泛应用。
电泳仪：北京六一仪
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