血红蛋白的提取与分离..pptVIP

(3)血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白 (4)分离血红蛋白溶液 ①过程 将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min 第1层（最上层）：甲苯层（无色透明） 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体） 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体） 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色） ②试管中溶液层次 用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体 ③分离 取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时 (5)透析 除去样品中分子量较小的杂质 ①过程 ②透析目的 2、凝胶色谱 （1）凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平 ②底塞的制作： 打孔 挖出凹穴 安装移液管头部 覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底 注意事项： ⑤安装其他附属结构 ③顶塞的制作 打孔 安装玻璃管 ④组装 将上述三者按相应位置组装成一个整体 （2）凝胶色谱柱的装填