第二十五章 微生物转化.pptVIP

一、基因工程技术在微生物转化中的应用 随着近年来分子生物学的发展，人们对基因工程的认识也逐步加深，这为微生物转化提供了新的思路。 基因工程技术的发展和实用化为此开辟了有效途径。只要生物细胞中存在有催化某一生化反应的酶，即使其量微不足道，应用基因重组技术，通过基因扩增与增强表达，人们就可能建立高效表达特定酶制剂的基因工程菌或基因工程细胞，从而进一步构建成新一代的催化剂——固定化工程菌或固定化工程细胞。 如，应用DNA重组技术建立了丝氨酸和色氨酸合成酶工程菌，这种工程菌组装的生物反应器可以用甘氨酸和甲醛为原料制造丝氨酸，反应液含丝氨酸超过400g／L，再从丝氨酸与吲哚转化生成色氨酸，反应液中色氨酸浓度达到200g／L。 此外．利用基因工程还可以将能进行生物转化的相关酶从微生物、植物甚至动物细胞中克隆出来．再导入一个微生物中进行表达，从而产生能对底物进行转化的一系列酶，将原来复杂的几种转化过程缩短为一个转化反应。目前在这方面的研究也是微生物转化的一个趋势，并且具有广阔前景。 二、固定化细胞转化技术在微生物转化中的应用 固定化细胞转化技术自20世纪70年代问世以来．已经广泛应用于工业、农业、医学、环境保护、能源开发以及理论研究等方面，并取得了丰硕成果。 利用固定化细胞转化技术，省去了破碎细胞提取胞内酶的过程，完整细胞得到固定后，酶活损失较少，活性回收率高，并且保持了细胞内原有的多酶体系，对于一些需要多步催化的反应过程，一步即可完成。 被固定的微生物细胞可以是处于生长状态或体眠状态的活细胞也可以是死亡的细胞(但胞内酶的活力仍 存在) 在微生物转化过程研究最多的是固定化活细胞包埋技术。常用的包埋材料有聚丙烯酰胺(PAA)、聚氨基甲酸乙酯(PU)、海藻酸盐凝胶、二氧基硅氧烷、葡聚糖凝胶、聚乙烯醇(PVA)等。 以海藻酸钙凝胶为例，其制备过程如下：在室温条件下，将一定浓度的海藻酸钠溶液与微生物细胞混合均匀后，滴加到氧化钙溶液中，形成球珠。 Kaul等采用了海藻酸盐固定化生物催化剂(简单节杆菌)和底物(氧化可的松)进行碳一位和二位脱氢反应研究。 每个凝胶珠都可以看成是一个小的生物反应器，由于缩短了扩散距离，转化率明显提高，反应结束后细胞还可以回收并重复使用 三、双水相转化技术在微生物转化中的应用 双水相转化技术早期主要用于生物分子和细胞的分离与纯化。 这是由于生物产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需要经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固一液分离带来了困难，另外这些产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境特别敏感．为了克服这些缺点．出现了双水相技术。近年来，该技术开始应用于微生物转化过程．为生物催化过程引入了一种全新的反应体系 双水相技术的核心是成相介质的选择以及介质浓度的控制，它直接影响到底物和产物在两相中的分配。 双水相体系基本上可以分为两大娄：高聚物-高聚物体系和高聚物-低分子物质体系。 高聚物一高聚物体系是较常用的，典型的例子如在水溶液中的聚乙二醇(PEG)和葡聚糖，当它们浓度达到一定时．溶液变浑浊，静止后形成两个液层，上层富集了PEG，下层则是葡聚糖。 Flygare等以聚乙二醇、葡聚糖及Brij35组成的双水相体系，利用分支杆菌(Mycobacterium sp.)进行胆固醇侧链降解制备雄甾-4-烯-3，17-二酮(AD)和雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮(ADD)研究，上层聚乙二醇富集了菌体，使得菌体具有较高的转化活力，转化速率可达到1.0mg／(g·h)。 四、超声波技术在微生物转化中的应用 超声波是指频率高于2×104Hz的机械波。 与其他声波一样，超声波可以在弹性介质中传播。因为超声波的波长很短，所以具有很强的定向传播能力。同时由于超声波在液体和固体中传播时吸收衰减很小，因此具有很强的穿透力。 根据超声波的使用范围，常可以将其分为两类：一类是高频超声，频率范围为I~10MHz，这一类主要用于医学成像和化合物结构的分析；另一类是功率超声，频率范围为15～60kHz，主要用于过程强化反应。 应用超声波技术，首先受到机械力的作用，而机械能又可以转化为热能。此外，当声强足够大时，又能产生空化效应。 超声波的机械效应包括振动效应和声流效应，指超声在媒介中传播时引起质点振动以及声流对质点的剪切力； 超声波的热效应指超声波在媒介中传播的过程中被传播介质吸收转变为热能； 超声波的空化效应指超声波激活气泡各种动力学的表现形式。 超声波技术应用于微生物转化过程，主要是涉及固液传质的生物体系。超声波可以产生上述的效应，较常规方法更有效地细化颗粒、增大传质表面。 这一过程主要发生于固液两相界面及细胞壁、细胞膜附近的区域。在超声场中，进行微生物转化的环境和菌体均处于不断