香榧子油对实验性动脉粥样硬化形成的影响.pptVIP

香榧子油对实验性动脉粥样硬化形成的影响 设计者和执行者： 陈超 陈小羽 江泽红 刁燕 杜圣富 孙永珍 香榧子油简介 榧子为红豆杉科Taxaceae植物榧树To肼eyagrand括Fort．eX Lindl．的干燥成熟种子，始载于《神农本草经》，历版中国药典均收载，具有杀虫、消积、润肠、通便之功效。其栽培品种香榧To用eya grandis CV．merriUii是我国特有经济树种之一。其种子俗称香榧子，为我国珍贵的干果，炒熟后香酥甘醇，风味独特，品质甚佳，营养丰富 香榧子油的药理作用 动脉粥样硬化的发病机制 1.脂质的作用：高胆固醇血症引起内皮功能障碍， 通透性增加 2.内皮损伤：各种因素对动脉内皮的损伤，导致动脉壁的慢性炎症应答，逐渐形成粥样斑块，是动脉粥样硬化的始动因素 3.巨噬细胞和平滑肌细胞的作用 主要内容： 实验目的： 从血脂,斑块面积／内膜面积、内膜厚度、内膜厚度／中膜厚度,巨噬细胞和平滑肌源性泡沫细胞等方面研究香榧子油对实验性动脉粥样硬化形成的影响. 研究方面： 实验假设： 香榧子油对实验性动脉粥样硬化形成可能有预防作用 实验设计: 1）实验仪器: 电子称，试管，离心管，冰箱，手术器材，一次性塑料注射器，图像分析仪 岛津UV．3000型紫外分光光度计，刖一182放射免疫卜计数仪。 2）实验试剂： 基础饲料（小麦粉39．2％、玉米粉15．1％、大米10．5％、豆粕15．1％、鱼粉15．1％、酵母粉，3．8％、鱼肝油0．7％及精盐0．5％）,高脂饲料(基础饲料82．5％、胆固醇2．0％、胆酸钠0．5％、蛋黄粉5．0％及猪油10％),香榧子油饲料(在高脂饲料的基础上添加香榧子油(自提)，其量占饲料的2％)。生理盐水、蒸馏水、乙醚。苏丹Ⅲ染液，苏木素依红(HE)、间苯二酚品红染色(ET+VG),2％戊二醛溶液,P0wervision一Pv6002试剂盒 3）实验对象： 30只健康家兔 4）实验方法和步骤： 实验分组与模型建立 1.动物按体重随机分3组，即正常对照组(基础饲料组)、高脂对照组和香榧子油实验组，每组10只动物。 实验步骤： 1.在实验分组与模型建立基础上第4、8、12周时取尾血，取血前12小时禁食。 2.第12周末取尾血后，乙醚麻醉，剖开胸腔心脏取血。 3.所取尾血置于洁净试管中后，2500 r／min离心5 min，取血清分装于3～4支1．5ml塑料尖底离心管中于0.30度冰箱保存，用酶学法测血清TC（胆固醇）、TG（甘油三酯）及HLD-C（高密度脂蛋白胆固醇）。 4.处死动物，取主动脉剥离外膜脂肪组织，纵行剖开置于4％多聚甲醛中保存。大体标奉行苏丹Ⅲ染色后摄像．图像分析仪测定斑块面积和内膜面积，计算斑块面积／内膜面积比。 5.于胸主动脉上段(第4肋问动脉处)和腹主动脉上段(腹腔动脉处)各取材5 mm，常规石蜡包埋，连续切片，制成4 μm厚横截面切片，分别行苏木素依红(HE)、间苯二酚品红染色(ET+VG)染色。将动脉等距分成5点(包括内膜最厚处)，利用图像分析仪测量内膜厚度、中膜厚度，计算内膜厚度／中膜厚度，最后将两段组织的指标加以平均。每组取2例动物胸主动脉上段组织放人2％戊二醛溶液中固定，扫描和透射电镜观察超微结构改变。 6.另取4μm厚胸主动脉上段组织(第4肋间动脉处)横截面切片用小鼠抗兔一巨噬细胞单克隆抗体RAM 1 1和小鼠平滑肌细胞单克隆抗体α-aelin进行常规免疫组织化学染色，特异性鉴定巨噬细胞和平滑肌源性泡沫细胞，采用P0wervision一Pv6002试剂盒，以EnVision复合物为二抗，设替代对照(PBS代替一抗)，胞浆内棕黄色颗粒状产物为阳性标记。采用显微一微机图像分析系统计算阳性细胞百分数。 统计学分析数据： 采用SPSS8．0统计软件进行数据的分析处理，所有数据均用均数±标准差表示，多组间比较用方差分析，两组间比较用￡检验，P0．05为差异有显著性。 四、预测结果: 五、参考文献 1.陈振德等．榧属植物的研究进展．国外医药·植物学分册，1996，11(4)：150 2.韩琴琴等．应用国产酶试剂测定血清胆固醇的方法．上海第一医学院学报，1984，11：181 3.张蚰美,魏欣冰动脉粥样硬化模型的病理形态学观察 1998 4.蔡海江,朱敏天,李子行免疫性损伤对家兔实验性动脉粥样硬化的影响 1979 6 .Tsukada T，Rosenfeld M，Ross R，etal. Immunocytochemical analysis of cellular components in athemsclerotie lesions：use of monoelonal anlI．bodies with t