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西伯利亚与黄天霸 正反交实验及杂种胚离体培养 夏晶1，吴学尉2，3，崔光芬2，3，吴丽芳2，3，王继华2，3，贾文杰2，3，张艺萍2，3基金项目 基金项目：国家科技支撑计划项目（2006BAD01A1803, 2007BAD45B01）；农业部948项目（2008-G3）；行业科技专项（200903020）。 作者简介：夏晶，1982-，女，重庆沙坪坝人，硕士研究生，主要从事花卉植物遗传育种研究。 * 通讯作者：张艺萍，助理研究员。 1西南大学园艺园林学院，重庆，400716； 2云南省农业科学院花卉研究所，云南昆明，650205； 3云南省花卉育种重点实验室，云南昆明，650205 摘 要：以西伯利亚和黄天霸为亲本进行百合杂交育种实验，探讨了亲本的花粉活力，进行正反交实验，比较了正反交的结实率，通过胚挽救技术在克服受精后障碍的应用，比较了不同培养基、培养条件对杂交胚生长效果的影响。结果表明：杂交后约60天的蒴果消毒后预培养一段时间再剥出胚乳并进行前期光照培养有利于胚的萌发，缩短萌发时间，提高萌发整齐度；GA3有利于胚前期迅速萌发，但后期长势细弱，不利于成球。 关 键 词：百合 杂交 胚培养 百合属(Lilium)植物属于百合科(Liliaceae)，全世界约有130种，我国有40多种[1,2]。百合作为切花已有2000年以上的历史，是重要花卉作物之一。目前全球用于切花生产的百合栽培品种大约有500多个[3],其中大部分是通过品系内或品系间的杂交培育而成的，且主要集中在亚洲系(Asiatic hybrids)、东方系(Oriental hybrids)、麝香系(Longiflorum hybrids)3个品系上。 百合属植物的种间杂交早在20世纪20~30年代国外就有研究。20世纪80年代以来，我国亦开始了百合的种间杂交育种工作，并利用远缘杂交获得了百合种间杂种。但百合种间杂交常有不亲和性，即使杂交成功，获得的杂种也常因生理或物理的原因，难以获得杂种苗。如何有效地获得杂种苗，这对提高百合育种效率是一个关键问题[4-7]。在百合种间杂交育种实践中，经常把胚培养技术作为克服杂交后障碍的有效手段，至今通过胚培养获得的百合种间杂交种有100余个[8-9]。20世纪90年代以来，随着研究的深入和技术上的改进，包括柱头切割、柱头嫁接、离体胚珠授粉、胚培养、子房切片培养、胚珠培养等技术的应用，不仅源于百合属不同种之间的种间杂交，而且源于不同百合类群杂交种之间的组间杂交也已取得了重要进展，特别是O(东方系，Oriental hybrids)×A(亚洲系，Asiatic hybrids)型杂交种选育获得成功，被誉为是百合育种的突破性进展[10-14]。 杂种胚培养成功的关键，一是筛选适宜的培养基，二是选择培养的适宜时期[3]。根据黄济明等人的报道，百合杂种胚培养的最适宜时期是在杂交后的60~70 d，但也有个别杂交组合可在杂交后的30 d左右培养成功，但诱导频率很低。本文报道了1个百合杂交组合（西伯利亚×黄天霸）的正反交实验及杂种胚离体培养条件的试验结果，并对在百合育种中的应用价值进行了探讨。 1 材料和方法 1.1 材料 西伯利亚（Siberia）、黄天霸（Manissa） 1.2 方法 1.2.1 杂交 在盛花期选取当天开放的花朵，待花粉散开后采集不同植株上的花粉，盛于培养皿，于干燥皿中过夜，取出以Parafilm封口，于零下20℃ 用毛笔蘸上待测花粉在花粉萌发培养基[15-16]（蔗糖100g/L+琼脂6g/L+硼酸0.02g/L，调PH值至5.8，为便于观察，加入琼脂，使其成为固体培养基）上涂抹一薄层，2-3小时后在显微镜下记数，统计不同品种花粉萌发率。在视野内随机数100粒清晰无重叠的花粉，萌发的按一下计数器，统计萌发百分率，连续统计2次。萌发率=（萌发花粉数/观测花粉总数）×100%。 1.2.2 采取正反交对其进行常规授粉。授粉30d后对杂交所得蒴果进行调查，统计有胚蒴果。 1.2.3 收取杂交后约60天，表皮开始发黄的蒴果，经4℃低温存放3-5天，用75%乙醇对表皮进行擦拭消毒，再浸泡30s，然后用0.1%升汞灭菌20分钟，以无菌水漂洗三次。从灭菌后蒴果中取出有胚种子于培养基（MS+NAA0.01+4%糖+0.5%PVP）上预培养，种皮开始褐化后在解剖镜下剥胚培养。剥出的胚置于3种不同的培养基和2种培养条件（光照培养和黑暗培养）下培养，30天后统计培养结果。 培养基： MS1：MS+GA30.2+2%糖+0.05%PVP MS2：MS+GA30.2+NAA0.1+2%糖+0.05%PVP MS3：MS+NAA0.1+2%糖+0.05%PVP PH：5.0-5.5 培养条件： 光照培养：培养室温度为(25士1)℃