评述与进展荧光偏振免疫分析技术的研究进展朱广华郑洪鞠先1引言2.PDF

( ) 第 32 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 1 期 2004 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 102～106 评述与进展 荧光偏振免疫分析技术的研究进展 朱广华　郑　洪　鞠　先 (南京大学化学系 ,配位化学国家重点实验室 ,南京 210093) 摘 　要 　对荧光偏振免疫分析技术的研究进展作了详细的评述。介绍了荧光偏振免疫分析技术的基本原理 和研究热点 , 评述了它在临床检验、环境与食品监测和农药残留量分析等领域中的应用 ,对荧光偏振免疫分 析方法的优缺点作了总结 , 引文献45 篇。 关键词 　荧光偏振 , 免疫测定 , 免疫标记 , 评述 1 　引　　言 自1954 年 Yallow 与Berson 提出放射性标记免疫分析法以来 , 免疫分析已成为生物化学、临床化学 与环境监测等领域中一个非常重要的方法。放射标记免疫分析法具有灵敏度高、特异性强和使用范围 广等突出优点 ,但它存在放射危害、污物难处理和标记物不稳定等方面的的问题。在放射标记免疫法的 启示下 ,相继发展了酶免疫法、化学发光免疫法、荧光免疫法和电化学免疫法等多种非放射性标记免 疫分析方法。这些方法各具特点 ,在实际应用中大都使用非均相免疫分析技术。非均相方法的灵敏度 高、特异性强 ,但因操作过程繁琐复杂而有很大的局限性。60 年代 ,Dandliker 开创性地建立了均相荧光 ( ) 偏振免疫分析方法 fluorescence polarized Immunoassay 以下简称 FPIA , 并用该法详细研究了生物系统中 抗原抗体和激素受体之间的作用[1 ,2 ] 。但因仪器及灵敏度等多方面原因 , 该方法一直未得到发展和 推广。均相法的最大特点是 :结合和未结合的抗原或抗体不需物理分离过程即可直接测定 ,使标记免疫 分析更方便地实现自动化。80 年代初 ,Jolley 等对 FPIA 方法作了改进 ,并将该法用于人体内治疗药物和 毒物含量的测定[3～5 ] 。近年来 , 国外有关应用于临床检验、毒品分析、农药残留量分析、环境和食品监测 等方面的 FPIA 方法的报道逐年增加 , 各种方法相继建立并已逐步推广应用。 在仪器装置方面 ,FPIA 的研究也取得了很大的进展。早期因缺乏专门的荧光偏振光分析仪器 ,荧 光偏振光强度测定的精度和灵敏度不高。80 年代后期 ,Abbott 实验室推出了商品化的 TDx 系列荧光偏 振光分析仪 , 同时配有近百种分析试剂盒。90 年代后 ,美国Jolley Consulting and Research 公司又推出了 更为先进的专用荧光偏振光分析仪 ,这种仪器有自动化程度高、测量精度好和输入参数多等优点[6 ] 。 2000 年 ,Baker 等设计了双光路荧光偏振光分析仪[7 ] 。这种仪器可以自动扣除背景干扰 ,在对复杂生物 样品进行测定时能获得更高的灵敏度和准确度。因而 FPIA 法广泛应用的时机已经成熟 , 一旦仪器与 试剂盒的价格降低 , 该方法必然会成为生化分析和环境监测中的一种重要工具。 2 　FPIA 方法的原理 2. 1 　荧光偏振的原理 荧光偏振的原理是 1920 年由 Perrin 建立的。这方面的详细论述可参见有关资料[6 ,8～10 ] ,其原理简 要介绍如下。从光源发出的一束光线经垂直起偏器后成为垂直偏振光 ,样品被垂直偏振光激发而产生 偏振荧光 ,此荧光经检偏器后可测出与样品浓度有关的水平或垂直方向的荧光偏振光强度。荧光偏振 ( ) 定义为 : 光强度 P 收稿 接受 ( ) 本文系江苏省社会发展基金 No. BS2001063 资助项目 © 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights