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浙江大学生物化学实验甲 2011-蔗糖酶蛋白质浓度和酶活性测定的原理课程设计.ppt
蔗糖酶蛋白质含量和酶活力的测定原理
一、蔗糖酶蛋白质含量的测定——
福林-酚法（Lowry法）
1.1、Lowry法的原理
Lowry法是由两组试剂作用于蛋白质产生有色物质，通过比色测知其蛋白质含量的方法。
这两组试剂包括磷钼酸及磷钨酸的混合试剂（福林-酚试剂）和碱性铜试剂。
其测定蛋白质含量的原理如下：
一、蔗糖酶蛋白质含量的测定
1.2、 比色法的测定原理
磷钼蓝和磷钨蓝的OD640 值与溶液中的蛋白含量成正比，
如以蛋白含量为横坐标，
OD640值为纵坐标，二者
之间的关系应为直线。
由未知样品的OD640值，通过标
准曲线，用作图法即可知道未知
样品的蛋白含量。如右图：
一、蔗糖酶蛋白质含量的测定
1.3、Lowry法的特点
Lowry法测得的含量为蛋白质的相对含量，样品浓度需按标准曲线进行校正。
可测范围：2-100微克。
操作比较简单，重复性较好，是至今生物化学研究中应用最多的方法。
缺点：酚类和其它具有还原性的物质对显色反应有干扰，
另外，该法标准曲线线性不是很好，因此每次测定均需制作标准曲线。
一、蔗糖酶蛋白质含量的测定
1.4、材料及试剂
1、实验材料
未知蛋白样品
2、实验试剂
标准蛋白质溶液配制见P89。
福林-酚试剂的配制及注意事项解说见P89。
1.5、实验步骤
实验中的注意事项及解说详见实验讲义P-89。
一、蔗糖酶蛋白质含量的测定
1.6、试验结果及处理
1、标准曲线的制作。
将所得的试验数据以蛋白含
量为横坐标， OD640值为纵
坐标，绘制标准曲线。
2、未知样品蛋白含量的确定。
根据未知样品的OD640值，通过标准曲线求出未知样品的蛋白含量。
二、蔗糖酶活力的测定原理
蔗糖酶活力单位（units）：在50℃，pH4.6条件下，每分钟能产生1mg还原糖的酶量。
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