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  中药制剂分析新技术新方法 中国药典中药分析方法发展趋势 1977版药典收载显微鉴别 1985版药典收载TLC鉴别 1990版药典收载对照药材的TLC鉴别和色谱方法的含量测定 2000版药典建立了以色谱法含量测定为主导的质控方法 2005版药典大幅度增加HPLC方法，重视特征成分、活性成分的测定 2010版药典增加了指纹图谱的测定 趋势：新方法新技术不断引入中药的质量控制中。 提纲 OUTLINE §1 现代色谱技术 1、顶空气相色谱法（液上气相色谱法、顶空分析法） 对样品基质上方的气体成分进行GC分析来测定这些组分在原样品中的含量 顶空气相色谱的分类 静态顶空GC 动态顶空GC 1、顶空气相色谱法 主要特点： 样品前处理简单 检测限低 可分析含量低、组成复杂的样品 适用于易挥发或易分解或无法直接进样分析的液体或固体样品的分析 §1 现代色谱技术 顶空气相色谱法应用实例 顶空固相微萃取 - 气相色谱法测定鱼腥草注射液中甲基正壬酮含量 样品制备：精密量取鱼腥草注射液 1ml，置顶空取样瓶中，精密加入内标物溶液 50μl，摇匀，密封，作为供试品溶液。 色谱条件 （略） 顶空分析条件 平衡温度为50℃，平衡时间为10分钟（快速搅拌下），阀、输送管及定量管温度为80℃，加压为13.8kPa，加压时间、充样时间和压力平衡时间均为0.15分钟，定量管为1.0ml。 §1 现代色谱技术 §1 现代色谱技术 2、超高效液相色谱（UPLC，Ultra Performance Liquid Chromatography） 主要特点 固定相 双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团 颗粒粒度小，仅为1.7μm 耐压，颗粒度分布范围很窄 §1 现代色谱技术 2、超高效液相色谱（UPLC，Ultra Performance Liquid Chromatography） 主要特点 检测器 响应快 样品池—10mm的光程（与普通HPLC相同）而体积只有500nL（普通HPLC的20分之一） 优点 更高的分析速度，更好分离效果和更高的灵敏度，速度、灵敏度及分离度，分别是HPLC的9倍、 1.7倍及3倍 样品的前处理 分子印迹技术 制备对特定目标分子具有分子识别性能的分子印迹聚合物的技术。 分子印迹聚合物兼备了生物识别体系和化学识别体系的优点, 具有抗恶劣环境、选择性高、稳定性好、机械强度高、制备简单等特点, 可选择性识别富集复杂样品中的目标物。 用于固相萃取、固相微萃取、膜萃取等样品前处理技术。 §1 现代色谱技术 3、超临界流体色谱（SFC, supercritical fluid chromatography） 以超临界流体（低黏度、高密度以及较高的扩散系数）作为流动相。 对GC及HPLC的检测器均可兼容使用 适用于分析GC难以处理的高沸点、不挥发性样品 分离速度较HPLC，分离效果更好。 应用实例 超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量 §2 高效毛细管电泳 电泳: 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象。 由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1937年 Tiselius (瑞典) 利用自由溶液电泳将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白 1981年 Jorgenson 和 Luckas 发展了高效毛细管电泳分离分析技术 (使用75μm内径石英毛细管和采用了高达数千伏的电压)， §2 高效毛细管电泳 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ν+ =ν电渗流 + ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致 ν- =ν电渗流 - ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反 ν0 =ν电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致 可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离 分离原理 电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象。 §2 高效毛细管电泳 仪器装置 电压：0～30KV。 分离柱不涂敷任何固定液， 紫外或激光诱导荧光检测器 可检测到：10-19～10-21mol/L §2 高效毛细管电泳 主要特点 优点 高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高灵敏度：可检测出低至10-21mol/L浓度的物质。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子;4分钟可分离10种蛋白质. 试样用量少：仅需几nL（10-9L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液 §2 高效毛细管电泳 常见的毛细管电泳模式 毛细管区带电泳(CZE) 毛细管胶束电