低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异表达文库的构建及分析.pdfVIP

ofSouthern 南方农业学报Journal 2014，45(9)：1662—1668 Agrieuhure ISSN2095—119l：CODENNNXAAB DOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．9．1662 低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异 表达文库的构建及分析 蒋小珍1，彭金霞2，韦嫔媛1‘2，陈晓汉2+ (1广西大学动物科学与技术学院，南宁530005；2广西水产科学研究院／广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室 南宁530021) 摘要：【目的】筛选出对虾耐寒相关基因，为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据。【方法】利用ss}I技术 构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库，并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT—PCR扩增等对差 减获得的耐寒相关功能基因进行验证。【结果】在构建的正、负文库768个克隆中有152个为低温高表达克隆、331个为常 温高表达克隆；将正文库100个克隆拼接可获得ESTs同源群39个，其中已知基因29个，主要涉及能量代谢、表达调控、信 号传导、细胞免疫、抗细胞凋零、蛋白质加工及其他基因等；将负文库50个克隆拼接可获得ESTs同源群18个，其中已知基 因17个，主要涉及细胞免疫、维持细胞代谢、物质转运、信号传导及其他基因等。经RT—PCR验证，从正文库中筛选出的 可有效筛选并验证凡纳滨对虾耐寒相关基因，为揭示对虾耐寒分子调控机制奠定基础。 关键词：凡纳滨对虾；抑制性消减杂交技术(SSH)；文库；耐寒相关基因；斑点杂交 中图分类号：$945．46 文献标志码：A 文章编号：2095—1 Constructionand ofSSH of white analysis librarypacific leg vannameitolow shrimpLitopenaeusexposed JIANGXiao—zhenl，PENG Xiao—han2+ Jing—xia2，WEIPing—yuanl…，CHEN Science (1AnimalandTechnology-College，GuangxiUniversity，Nanning Genetic and ofFisheries 530021，China) BreedingHealthyAquaculture，GuangxiAcademy Science，Nanning coldrelated of Vallllallleiwerescreenedto scientificrefer— Abstract：【Objective】SomegenesLitopenaeus provide fortmther Vallllalllei． differential ences oncoldresistantmolecularmechanismof study Litopenaeus 【Method】Twogene librariesforthe andthe wereconstructed Sub—- expression low—