项目5谷氨酸发酵代谢曲线测定.ppt

由于发酵的目的不同，发酵培养基与种子培养基有所不同。 发酵工业的生产流程一般是：保藏斜面→活化斜面→摇瓶种子→种子罐→发酵罐，小型实验可以略去种子罐一步。 发酵罐的条件控制优于摇瓶，产物产量更高。 发酵生产过程中要随时观察菌体生长情况。从培养液外观变化和镜检两方面着手，及时发现并处理染菌事故；定时取样检测相应的参数，尤其是菌浓、残糖及产物产量，反馈调节发酵罐控制条件，如搅拌转数、碱液、消泡剂流加速度等。 分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化 菌浓的测定方法有分光光度计法和干重法，生产中一般采用前者。 残糖及谷氨酸产量一般采用SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析仪测定。 亦可用葡萄糖试剂盒测定残糖，纸层析法测定谷氨酸产量。 1.菌种 黄色短杆菌 2.器材 恒温摇床、培养箱、5L发酵罐、SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析仪、分光光度计、250mL三角瓶、吸管（10mL、1mL）、洗瓶、吸水纸、接种环、显微镜、载玻片、盖玻片 3.培养基和试剂 5mol/L NaOH溶液、泡敌、保藏培养基、活化培养基、种子培养基、发酵培养基 1.菌种活化 取保藏斜面菌种划线接种于活化斜面，32℃培养24h。 2.种子培养 接一环生长良好的的活化斜面种子至装有30mL种子培养基的250mL摇瓶中，8层纱布封口，32℃、100rpm的恒温摇床上培养至对数生长中后期。 3.发酵培养 种子液镜检无杂菌。加大发酵罐的通气量，以10％接种量接至装有3L发酵培养基的5L发酵罐中。 接种完毕，5L发酵罐各项参数设置如下：通气量3L/min，转速250rpm，温度32℃，pH值7.0，培养30～40h。发酵期间，流加尿素以补充氮源，每隔4h取样测定OD620nm值（将发酵液稀释20倍后，用分光光度计于吸光度620nm处测定）、谷氨酸产量和残糖量。 认识噬菌体，学习并掌握噬菌体的分离技术。 噬菌体的存在，往往给发酵生产带来危害，但从分子遗传学研究方面,噬菌体确是一个很好的工具。因此认识和掌握噬菌体的习性，使之造福于人类是十分重要的。 噬菌体在自然界的广泛分布，往往造成微生物发酵工业的严重损失与困难。如果生产菌株被一个噬菌体侵染，那么它会很快地在菌体内得到增殖，并迅速裂解释放出100个左右的子代噬菌体，其后果是严重的。因此，充分了解噬菌体的特性，对于防止生产中的噬菌体污染具有一定的实际意义。 1．样品 味精厂土样，黄色短杆菌。 2．培养基 肉汤固体培养基，肉汤半固体培养基 3．器皿 平皿，试管，三角瓶等。 1．噬菌体的繁殖 (1)首先将黄色短杆菌接入装有20毫升肉汤培养基的三角瓶中，32℃培养12小时，使细胞生长至对数中期， (2)加入土样1克、碳酸钙0.3克摇匀继续培养24小时，培养液经4000转/分离心10分钟，取上清液至无菌瓶中，作为第一次噬菌体增殖液。 2．噬菌体增殖液的稀释 离心第二次增殖液，取上清液用肉汤液体培养基以10倍稀释法适当稀释，取后三个稀释度的稀释液用以分离。 3．噬菌体的分离 融化固体、半固体培养基，先倒底层固体培养基平板，凝固后，分别取上述三个浓度的稀释液0.5毫升于底层培养基上，然后在融化后并冷却至50℃的半固体培养基中加入5毫升黄色短杆菌菌液，摇匀，倾注于上述平板上，与其中的噬菌体增殖液混匀放置。待凝固后于32℃保温箱中培养24小时。 4．噬菌体的选择 观察平板中噬菌斑的形成，用接种针在噬菌斑中刺几下，接入有肉汤培养液的试管中，适当稀释，再次以上述双层平板法分离。如此反复进行大约5次，就可得到形态大小基本一致的噬菌斑。该噬菌斑便可作为一个噬菌体的纯株应用。 1．详细描述分离过程中噬菌斑的形态及变化 2．如果经多次分离纯化仍得不到形态一致的噬菌斑，如何解释? 谢谢！ 2 噬菌体的分离检查 训练项目2 制药微生物发酵技术 实训材料 2 噬菌体的分离检查 训练项目2 制药微生物发酵技术 实训步骤 2 噬菌体的分离检查 训练项目2 制药微生物发酵技术 2 噬菌体的分离检查 训练项目2 制药微生物发酵技术 归纳总结 制药微生物发酵技术 菌体代谢曲线的绘制和菌体生长四期的特点；噬菌体的分离技术 应知应会 制药微生物发酵技术 代谢（metabolism）噬菌体（phage） 问题与讨论 制药微生物发酵技术 制药微生物发酵技术 以时间为横坐标，OD620nm值、残糖量和谷氨酸产量为纵坐标，画出谷氨酸发酵的代谢曲线，并分析菌体生长四期的特点。 问题与讨论 制药微生物发酵技术 问题与讨论 制药微生物发酵技术 问题与讨论 作业 : 制药微生物发酵技术 代谢曲线的绘制 学生根据结果，上交 谢谢各位专家！ 恳请指导 谢谢！ 制药微生物发酵技术 Pharmaceutical microbial fe