口腔细菌的培养及应用.ppt

组织工程的核心问题是： 建立由细胞和生物材料构成的三维空间复合体 优点： 形成具有生命力的活体组织 用最少量的组织细胞修复大块组织缺损 任意塑形 组织工程的关键技术: 组织构成细胞的培养 生物组织是由实质细胞和间质细胞构成。对于组织工程来说，首先要求获取所要培养组织的细胞。细胞可来源于自体细胞，这是一种较常规的选择，可以避免机体的免疫排斥反应，但是受到种类、数量、时间等限制。因此必须考虑其它方式来获取细胞，如应用治疗性克隆技术从胚胎干细胞诱导分化成组织特异干细胞或应用转基因技术获得工程细胞。获取细胞后，还要研究细胞扩增防老化技术及其机理，干细胞快速、规模扩增等问题。 生物材料及构架制备 为了形成具有三维结构的组织，必须提供一个构架，构架选择的聚合体必须有足够的弹性提供细胞一个类似生命体的力学环境，充分多的孔隙允许培养液浸润生长的组织，传输营养物质和清除细胞代谢废物，随着组织的生长能够自我降解，但是降解速度不能太快，要有足够的时间保证细胞长进去，及时填补聚合体溶解留下的空隙。所以必须用多分支的、多孔渗水的聚合物材料制作网络构架，常用的有聚羟基乙酸、聚乳酸类等生物材料。 其关键技术主要包括基体材料改性、表面修饰、表面活性组装、降解速率调控、三维构架设计和制备等等。 良好的生物相容性 生物降解性 良好的表面活性 具有多孔性 组织工程支架材料的要求： 生物组织工程化培养系统的研究 力学环境(微环境—应力分布)是诱导、调控细胞功能分化，影响细胞能动运动、粘附、聚集以及细胞之间的相互作用，进而决定其生物图式的构成的重要因素。 另一方面，细胞的生长要求一定的化学微环境。在离体培养条件下，化学微环境稳态的维持必须通过特殊设计的传质过程实现。而传质过程总是和介质的应力分布耦合在一起的。因此，组织工程中的细胞／组织培养系统和生物化学工程中传统的生物反应器有质的区别，它的研究涉及组织工程学的一些基本的科学问题，而它本身又是组织工程的关键技术之一。 二、 口腔干细胞研究 　　　干细胞（Stem cell）即起源细胞。在细胞的分化过程中，细胞往往由于高度化分而完全失去了再分裂的能力，最终衰老死亡。机体在发展适应过程中为了弥补这一不足，保留了一部分未分化的原始细胞。 　　　因此，干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 概念 全能干细胞 多能干细胞 单能干细胞 按分化潜能 按发育状态 胚胎干细胞 成体干细胞 干细胞的分类 全能干细胞： 具有形成完整个体的分化潜能。如胚胎干细胞（ES细胞） 多能干细胞： 具有分化出多种细胞组织的潜能。如造血干细胞、神经干细胞。 单能干细胞： 只能向一种或两种密切相关的细胞类型分化。如上皮组织基底层的干细胞，肌肉中的成肌细胞。 成体干细胞研究是干细胞研究中最激动人心的部分。它可以有效地防止组织排斥，可以避免伦理学、法律系方面的争论。 成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统，具有修复和再生的能力。成体干细胞在其中起着关键的作用。在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。 牙髓干细胞 牙乳头干细胞 三、 组织工程学在口腔医学中的应用 在颌面重建中的应用 引导口腔组织再生 组织工程化粘膜在口腔医学中的应用 用于人造涎腺的初步研究 * 功能特点 分泌功能 矿化功能 收缩功能 附着能力 再生能力 增殖分化影响因素 生长因子 胰岛素 纤维粘连蛋白 抗坏血酸 羟基磷灰石 二、唾液腺细胞 细胞形态特点 腺泡上皮细胞 导管上皮细胞 肌上皮细胞 免疫组织化学染色 腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、 前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应 导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应 肌上皮细胞： 肌动蛋白、S－100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应 功能特点 分泌功能 腺泡细胞：淀粉酶、PRP、唾液过氧化物酶、特异蛋白等 腺泡上皮细胞：顶端分泌、基底及侧膜分泌 导管细胞：胶原 肌上皮细胞：胶原 唾液腺细胞的增殖分化 基底潜能干细胞理论 单细胞全能干细胞理论 双细胞亚全能干细胞理论 增殖分化功能影响因素 细胞因子 激素 细胞外基质 钙离子 三、口腔粘膜细胞 培养方法 组织块法 酶消化法 细胞形态特点 免疫组织化学染色 波形丝蛋白表达阴性 多种角蛋白表达阳性 功能 分泌：胶原蛋白和非胶原蛋白 金属蛋白酶 四、颌骨相关的硬组织细胞 破骨