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病毒学(Virology) 病毒学（Virology） 病毒学是研究病毒这一特殊生命形式的性质及其与宿主相互作用的关系的自然学科，是跨生物学、医学、农学的交叉学科，是分子生物学研究领域的前沿学科。 第一章 绪论 第一节 病毒学研究的对象与任务 一、病毒学研究的对象 病毒（Virus）是一种特殊的生命形式，是一种极为简单的生命形式。 （一）病毒的特点 1、病毒结构简单 (1)不具有细胞结构 (2)只具有一种核酸（DNA或RNA） (3)不含核糖体和完整的酶系统，也不具有能量合成和代谢系统。 2、独特的繁殖方式 (1)不具有双分裂 (2)以复制方式进行繁殖 3、绝对的细胞内寄生 4、病毒的二重性 (1)病毒存在形式的二重性 *细胞外具有感染性的颗粒形式 *细胞内具有繁殖性的基因形式 (2)病毒结构形式的二重性 *完全病毒与缺损病毒（defect virus） *病毒与假型病毒(pseudo type virus)、假毒粒(pseudovirion) *病毒颗粒与空壳 (3)病毒来源的二重性 * 外源性病毒 从细胞外到细胞内在细胞间水平传播的病毒 * 内源性病毒 在宿主发育早期感染宿主，病毒基因组整合于宿主基因组并与其同步复制，随细胞分裂垂直传递给子代细胞，但因其受宿主细胞控制，病毒基因组只能部分表达，故没有子代病毒产生，且对宿主一般不造成伤害。 （二）病毒的定义 病毒是占据一定生境，并具有独立于其宿主进化史的绝对细胞内寄生物，其基因组（DNA或RNA）被其自身编码的蛋白质外壳所包围。 (三）、病毒的宿主范围 宿主范围：病毒所能感染的宿主和宿主细胞的种类 按宿主种类划分 Euvirus Virus Subvirus Viroid Satellite agent Satellite RNA Satellite virus Prion （四）、病毒的起源 三种假说： 病毒起源于细胞的DNA/RNA 病毒的退行性进化假说 病毒起源于具有复制能力的寡聚核苷酸 四、病毒学研究任务 理论方面：推进现代生物学的发展 应用方面： 控制和消灭危害人类健康和社会发展的病毒危害 利用病毒对有害生物进行生物防治 促进生物高新技术的发展 第二章 病毒学研究的基本方法 一、病毒的分离 （一）标本的采集与处理 （二）标本的接种： 　　　　实验宿主（动物、植物或细菌）， 　　　 　　　　　鸡胚或细胞培养 （三）病毒存在的认定 　　1、系统症状 2、局部反应 　　(1)噬菌体—噬菌斑(plaque) 噬菌体感染生长在营养琼脂平板上的细菌所形成的，具有一定大小和形状的透明区域。 　　(2)动物病毒—蚀斑或称空斑(plaque) 　动物病毒感染单层细胞培养所形成的局部病损区域，系由病毒的致细胞病变作用所引起． 　 致细胞病变作用（Cytopathic effect ， CPE） ： 病毒感染细胞培养引起的细胞显微表现的改变，如细胞聚集成团，肿大、园缩、脱落、细胞融合形成多核细胞、细胞内出现包涵体（inclusion body），乃至细胞裂解等 （３）植物病毒－坏死斑或称枯斑（necrosis spot） 　 植物病毒感染敏感植物叶片所形成的局部病损区域． （四）盲传（blind passage） 　将取自经接种而末出现感染症状的宿主或细胞培养的材料，再接种于新的宿主或细胞培养，以提高病毒的毒力或效价． 二、病毒的纯化 (一)病毒的纯化 1.病毒纯化的标准 (1)纯化的病毒制备物应保持感染性 (2)纯化的病毒制备物应具有均一性 病毒制备物均一性检查的方法 包括：电镜检查、超速离心、电泳和免疫学方法 （二）病毒纯化的方法 1,病毒纯化方法的依据 (1)病毒颗粒具有一定的大小和密度，在离 心场中能以一定的沉降速率沉降 (2)病毒颗粒的主要化学组成为蛋白质 2.病毒纯化的方法 包括:超速离心,沉淀法,凝集技术,液态两相分配系统,有机溶剂萃取,层析和电泳等 三、病毒的测定（assay of vrvuses） 病毒的测定即病毒的定量分析 (一) 病毒的物理颗粒计数 1. 电镜计数，将待测病毒样品与已知数目的聚苯乙烯乳胶颗粒均匀混合后置电镜观察，统计病毒颗粒数目与乳胶颗粒数