细胞生物学荧光技术原理和应用.docVIP

《细胞生物学荧光技术原理和应用》读书报告 一、书名：细胞生物学荧光技术原理和应用 二、著者：刘爱平 主编 三、出版社：中国科学技术大学出版社2007-2-1第一版 四、页数：320 五、内容大意： 随着生命科学研究的快速发展，生物荧光技术在细胞免疫学、微生物学、分子生物学、分子遗传学、神经分子生物学、病理学、肿瘤学、临床检验学、医学、植物学等方面的应用越来越广泛；制备各种荧光生物样品的方法越来越多；用于荧光检测的仪器种类不断增加，而且也越来越先进。荧光技术已经成为生命科学研究的重要手段之一。 本书共分三部分：第一部分介绍荧光的基本知识、发展史、荧光探针、活体荧光材料——绿色荧光蛋白(GFP)及最新型荧光材料——量子点；第二部分介绍荧光技术在生命科学中的应用及荧光生物样品的制备方法；第三部分介绍了中国科学技术大学生命科学学院现已拥有的生物荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、细胞遗传工作站、活细胞荧光工作站、流式细胞仪、荧光定量PCR仪等荧光检测仪器的基本原理、操作步骤及注意事项。书中彩页的大部分照片是使用中国科学技术大学生命科学学院拥有的上述各种荧光检测仪器获得的。 六、读后心得： 本书编写目的是为了给对细胞生物学荧光技术感兴趣的老师、研究生和本科生提供基本知识、相关的实验方法和技术参考。我的专业是有机化学，研究的专业方向是复合份菁染料及其在光动力疗法中的应用，其中要用到很多细胞生物学荧光技术方面的知识。因而在本书的阅读过程中也是有选择性的重点阅读与自己专业相关的部分,即前两部分，因为第三部分涉及到具体的仪器操作，与平时实验研究距离很远，不略去不读。 我们实验室研究内容之一—菁染料，它属于荧光色素，是能够产生荧光并能作为染料的化合物。这类有机化合物有着这样的分子结构特征：分子中具有刚性结构和平面结构的π-π共轭体系。有机化合物分子中具有的π电子共轭结构者，其荧光效率随着π电子共轭程度的增加而增大，所发生的荧光光谱也将向长波长方向移动。任何有利于提高π电子共轭程度的结构改变，都能提高荧光效率或使荧光波长长移。菁染料是一类具有特殊结构的功能性化合物，其分子内部含有n个次甲基－CH＝（称为甲川基）组成的共轭链（n可为奇数或偶数），共轭链与其两端或中间连的杂环、芳环、环烯化合物等形成了一个大的π共轭体系。它具有摩尔吸光系数高、光谱响应范围广以及荧光量子产率高等特性。基于这些性质特点，菁染料在核酸测定、蛋白质分析、作为活细胞染色剂、肿瘤检测及癌细胞识别、作为生物大分子的标记物及光动力疗法中有广泛的应用。 对于第一部分中，本人比较感兴趣的是第四章—常用的荧光染料（探针），细胞器荧光探针和研究钙调节及活性的荧光探针。细胞器的荧光探针是一类能够渗透到细胞内，并能选择性地与细胞中的细胞器结合的荧光物质，其实质就是荧光染料。细胞器的荧光探针不但可用于固定细胞中的细胞器染色，而且还可以用于活细胞中的细胞器染色。荧光染料可以选择性地与线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体结合，再利用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜观察，可得到这些细胞器的高分辨率的清晰图像，这对于研究细胞形态有很大的帮助。菁染料也可以用于活细胞染色中，染料可以透过细胞膜进入细胞中，将线粒体染色，而且发现对线粒体染色具有特异性。 钙离子作为细胞内的第二信使具有重要的生物学功能，而钙离子的信使功能是通过细胞内游离钙离子浓度及其分布的变化来实现的，钙离子信号的产生和终止是细胞内钙离子增减及波动的结果。因此细胞内钙离子含量及其分布变化的动态监测对于钙离子信号传递本质的认识至关重要。第二信号系统是当前研究的焦点，本书中介绍了以下几种荧光探针可供这方面的研究：钙调蛋白荧光探针、蛋白激酶C的荧光探针、钙离子的荧光探针。目前，细胞内游离钙离子的研究主要采用荧光探针标记，通过荧光显微成像分析来实现，钙离子荧光探针的设计合成是在对钙离子高度专一的钙离子螯合剂的母体上连接适当的荧光发色团和靶向定位基团，通过改变钙离子螫合剂具有的配位功能团或与之相连接的荧光发色团和靶向定位基团结构，即可获得具有不同分析性能的钙离子荧光探针。螯合剂部分主要决定探针与钙离子结合的亲和力和选择性；而荧光发色团部分除了作为螯合剂分子上的取代基对探针与钙离子结合的亲和力和选择性有影响外，还主要决定试剂的光谱性能。 而菁染料作为荧光探针与现有的其它荧光标记试剂如罗丹明、荧光素等相比更具优越性，其原因总结起来主要有以下几点：第一,菁染料类型众多,广泛分布在波长350nm到几乎1200nm的区域中,具有很大的可比性及选择性。它们与生物分子键合后的活性衍生物能用于同时测试多种物质,多色或多参数分析对于简化操作,降低成本极为有利,且可提高在一个复杂的混合体系中不同被标示成分的测定速率；第二,大多数菁染料及其衍生物的荧光较强； 第三, 这类染料具有相对的光