嗜热共生杆菌内消旋-2二氨基庚二酸脱氢酶中Y76对-微生物学报.PDF

1108 生 物 工 程 学 报 赵雷明 等/ 嗜热共生杆菌内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶中Y76 对辅酶偏好性影响 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn July 25, 2015, 31(7): 1108−1118 DOI: 10.13345/j.cjb.140523 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 研究报告 嗜热共生杆菌内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶中 Y76 对辅酶偏好性影响 1,2 2 2 1 2 2 2 赵雷明 ，刘卫东 ，陈曦 ，王敏 ，冯进辉 ，吴洽庆 ，朱敦明 1 天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室，天津 300457 2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室 天津市生物催化技术工程中心，天津 300308 赵雷明, 刘卫东, 陈曦, 等. 嗜热共生杆菌内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶中 Y76 对辅酶偏好性影响. 生物工程学报, 2015, 31(7): 1108–1118. Zhao LM, Liu WD, Chen X, et al. Effect of residue Y76 on co-enzyme specificity of meso-diaminopimelate dehydrogenase from Symbiobacterium thermophilum . Chin J Biotech, 2015, 31(7): 1108–1118. 摘 要: 辅酶NAD(H) 相比NADP(H) 有稳定性好、价格低廉及更广的辅酶循环方法等优势，因此在实际应用 中常需将 NADP(H) 依赖型的脱氢酶改造成为 NAD(H) 依赖型的。来源于嗜热共生杆菌 Symbiobacterium thermophilum 的 NADP(H) 依赖型内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶 (meso-2,6-diaminopimelate dehydrogenase, StDAPDH) 及其突变体酶是催化还原氨化合成 D-氨基酸的优良催化剂，本研究试图改变其辅酶偏好性，增强 其应用优势。对其晶体结构分析可知，氨基酸残基Y76 距离腺嘌呤较近，R35 及 R36 和辅酶上磷酸基团有直 接相互作用。依氨基酸侧链基团性质对 Y76 进行了定点突变，发现不同突变子对两种辅酶的偏好性都发生了 变化；对与磷酸基团直接作用的R35 、R36 进行的双突变 R35S/R36V ，导致酶对NADP+ 的催化活力降低；将 + + R35S/R36V 和部分Y76 突变进行了组合，发现三突变组合以NAD 为辅酶时的活力均大于以NADP 为辅酶的 活力，实现了辅酶偏好性转变。这些研究工作为进一步实现StDAPDH 的辅酶偏好性完全转变提供依据。 关键词: 氨基酸脱氢酶，内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶，辅酶偏好性，突变 Received: October 30, 2014; Accepted: January 19, 2015 Supported by: Key Deployment Project of Chinese Academy of Sciences (No. KSZD-EW-Z-016-3