果蝇唾腺染色体标本的制作和观察一.PPT

* 实验七、果蝇唾腺染色体标本的制作和观察 一、实验目的 1.学习剖离果蝇幼虫唾腺和压制唾腺染色体标本的方法 2.观察唾腺细胞的巨染色体的特征 二、实验原理 果蝇唾腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线多达500～1000条，其长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，还可以结合遗传实验结果进行基因定位。此外，由于其体细胞同源染色体的配对，故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。 三、实验材料、器具和药品 1.材料：果蝇三龄幼虫 2.器具及药品：普通生物显微镜、双目解剖镜、培养瓶、载玻片、盖 玻片、镊子、解剖针、冰醋酸、石碳酸品红、0.7%生理盐水、1MHCl等。 3.培养基：玉米琼脂培养基 四、实验步骤 1.幼虫培养 置于16—18℃下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前， 即为三龄幼虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想 时期。 2.腺体剖取 选取发育良好、虫体肥大的三龄幼虫置于载玻片上， 加几滴0.7%生理盐水，在双目解剖镜下，左手持解剖针压住虫体中后 部，右手持解剖针按住头部（即口器稍后处），轻轻向前拉动，使头部 扯离虫体，从而拉出唾腺。腺体为一对囊状结构，位于食道两侧，由单 层细胞构成，在解剖镜下成透明状态；腺体侧常有少量泡沫状脂肪体， 呈乳白色当剔除；最后留下一对腺体待用。整个剖取过程须在生理盐水 中进行。 3.解离 把载玻片上的幼虫其它部分除去，用吸水纸小心吸去生理盐水（注意吸水纸应离唾腺远些，以免吸附唾腺），加1滴1M HCl，浸2-3分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开。 4.染色 用吸水纸吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干，加2滴石碳酸品红染液，染色5分钟（此过程应保持腺体一直处于染液的浸泡中）。 5.压片 盖上盖玻片，然后用吸水纸包被玻片，吸干多余染色液，用拇指在盖玻片上用力压片(注意勿使盖玻片移动)。 6.观察 将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。对染色体分散、个体性清楚的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，以便对照模式照片辨认出不同的染色体臂。 六、实验报告? 绘制你所观察到的果蝇唾腺染色体的图像，标明染色中心和5条臂。 *