课件：第二章微生物的纯培养和显微技术.ppt

第二章微生物的纯培养及显微技术 §1 微生物的纯培养 2019 - 1 一、无菌技术 一、无菌技术 分离——把自然界中以混杂状态生长在一起的各类微生物单个分开。 筛选——根据菌种的形态特征和生理特征的不同结合生产实际的要求，灵活地、有的放矢地设计出各种优选方法以便快速而准确地挑选出所需要的菌种。 1、微生物培养的常用器具及其灭菌：试管、三角瓶、培养皿等。 2、接种操作 2019 - 2 二、用固体培养基分离纯培养 菌落：在固体培养基上形成的子细胞群体。 纯培养：由一个细胞繁殖而成的群体，又称克隆。 菌苔：指菌体在固体培养基表面密集生长时，多个菌落融合在一起联成一片称菌苔。 2019 - 3 分离方法 1、平板划线分离法 2、三角玻璃刮棒连续涂布法 3、稀释分离法 常见的有十倍稀释法：每稀释一次菌细胞的浓度下降十倍。 4、稀释摇管法。 2019 - 4 1、平板划线分离法（Streak Plate） 特点：快速、方便。 分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） An inoculating loop is used to thin out organisms on the surface of the agar. 2019 - 5 连续划线 划线分离后平板上显示的菌落照片 2019 - 6 平板划线分离图 2019 - 7 平板涂布分离法（Spread Plate） 简单易行，但易造成机械损伤 Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod. 2019 - 8 三角玻璃刮棒连续涂布图 2019 - 9 稀释分离法 Organisms are serially diluted, then a small amount is added to an empty sterile petri dish, to which melted agar at 50 ºC is added. Then mix to distribute the organisms. 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 9ml 9ml 9ml 9ml 2019 - 10 十倍稀释图 2019 - 11 经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物. 三、用液体培养基分离纯培养－－液体稀释法 2019 - 12 四、显微单细胞（单孢子）分离法 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。 毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。 显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。 小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。 2019 - 13 五、选择性培养分离法 为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。 ＊利用选择培养基进行直接分离 以纤维素或淀粉作唯一碳源可获分解菌。 ＊富集培养 滤纸条培养基；石蜡油培养基 2019 - 14 厌氧微生物分离方法 ①物理方法 A．抽气法——将培养物置真空干燥器中抽真空，再培养。 B．充气法——把培养物放一密闭贮器中充入N2（排尽空气） 2019 - 15 ②化学方法 A．化学吸氧法——利用化学反应耗氧达到形成厌氧环境的目的。 ⑴用焦性没食子酸（1g）与NaOH（10%）反应除氧（100ml空气中的O2）。 ⑵密闭容器中利用硫磺或磷的燃烧耗氧形成厌氧环境 ⑶NaHSO3+NaCO3混和反应耗氧 B．培养基预还原法 培养基中加入还原剂（半胱氨酸、Na2S Vc）再隔绝空气培养，适于培养专性厌氧菌。 ③生物方法 与需氧微生物共同培养 2019 - 16 六、二元培养物 纯培养物：只有一种微生物的培养物。 混合培养物：含有两种以上微生物的培养物。 二元培养物：只含两种微生物且有意识地保持二者之间特定关系的培养物。 2019 - 17 （一）菌种的衰退与复壮的概念 1.衰退（degeneration） ：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 衰退的原因：①基因突变，②分离现象。 常见的衰退现象： 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；