线粒体DNA介导细胞焦亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应.PDF

中华危重病急救医学 20 18 年 2 月第 30 卷第 2 期 Chin Crit Care Med ，February 20 18 ，Vol.30 ，No.2 · 97 · ·论著 · 线粒体 DNA 介导细胞焦亡放大 肺泡巨噬细胞炎症反应 ， （ 、 、 、 、 、 330006 、 ）， （ ） ： ， ： Email ndyfyicu@email.ncu.edu.cn DOI ：10.3760/cma.j .issn.2095-4352.20 18.02.00 1 【 】 摘要 目的 观察线粒体 DNA （mtDNA ）对脂多糖 （LPS ）诱导 的大 鼠肺泡 巨噬细胞炎症反应 的放大作 用 ，并初步探讨其可能机制 。方法 提取 SD 大 鼠肝脏组织 mtDNA ，采用超微量分光光度计及 1% 琼脂糖凝胶 电泳检测其浓度及质量 。分离和培养 SD 大 鼠肺泡巨噬细胞 ，取处于对数生长期 的细胞 ，并将其分为磷酸盐缓 冲液 （PBS ）对照组 、LPS 组 、mtDNA 组和 LPS+mtDNA 组 4 组 ，前 3 组分别在肺泡 巨噬细胞培养基 中加入等体 积的 PBS、LPS 1 mg/L 或 mtDNA 10 mg/L 刺激 6 h 和 12 h ；LPS+mtDNA 组在肺泡巨噬细胞培养基 中加入 1 mg/L LPS 刺激 6 h 后再加入 10 mg/L mtDNA 共 同刺激 6 h 。采用酶联免疫吸附试验 （ELISA ）检测细胞上清液 中白细 胞介素 -1β（IL-1β）、肿瘤坏死 因子 - α（TNF- α）含量 ；采用蛋 白质免疫印迹试验 （Western Blot ）检测细胞焦 亡关键蛋 白 Gasdermin D （GSDMD ）的表达 。结果 ① 所提取的大 鼠肝脏组织 mtDNA 在波长 260 nm 和 280 nm 处 的吸光度 比值 （A260/280 ）介于 1.8 ～2.0 ，琼脂糖凝胶 电泳可见大小约 16 kb 的单一条带 。② LPS、mtDNA 分别 刺激肺泡 巨噬细胞 6 h 和 12 h 后 IL-1β、TNF- α含量均较 PBS 组 明显升高。LPS 刺激 6 h 后再加入 mtDNA 共 同刺 激 6 h 组 IL-1β含 量 较 LPS 12 h 组 进 一 步 升 高 （ng/L ：366.27 ±23.35 比 154.70 ±23.32 ，1 ＜0.0 1），而 TNF- α含量与 LPS 12 h 组相 比差异无统计学意义（ng/L ：836.13 ±25.0 1 比 802.67 ±30.48 ，1 ＞0.05 ）。③ LPS 组 、 mtDNA 组 、LPS+mtDNA 组 GSDMD 蛋 白表达均较 PBS 组 明显升高 （GSDMD/ β-actin ：1.77 ±0.05、1.65 ±0.04 、 2.40 ±0.05 比 1.00 ±0.02 ，均 1 ＜0.0 1），且 LPS+mtDNA 组 GSDMD 蛋 白表 达 较 LPS 组 进 一 步 升 高 （1 ＜0.0 1）。 结论 mtDNA 对 LPS 诱导 的大 鼠肺泡 巨噬细胞炎症反应具有放大作用 ，其机制可能与 mtDNA 增加细胞焦亡 有关 。 【 】 线粒体 DNA ； 细胞焦亡 ； 肺泡巨噬细胞 ； 炎症反应 关键词 基金项目：国家 自然