魁蚶Scapharcabroughtonii血红蛋白Ⅰ基因克隆及-渔业科学进展.PDF

第40 卷 第 1 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.40, No.1 2 0 1 9 年 2 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Feb., 2019 DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180206001 / 赵庆, 吴彪, 刘志鸿, 孙秀俊, 周丽青, 杨爱国, 张高伟. 魁蚶(Scapharca broughtonii)血红蛋白Ⅰ基因克隆及表达特征. 渔 业科学进展, 2019, 40(1): 84–91 Zhao Q, Wu B, Liu ZH, Sun XJ, Zhou LQ, Yang AG, Zhang GW. Cloning and expression analysis of hemoglobin gene Ⅰof Scapharca broughtonii. Progress in Fishery Sciences, 2019, 40(1): 84–91 魁蚶(Scapharca broughtonii)血红蛋白Ⅰ 基因克隆及表达特征* 赵 庆1,3 吴 彪1,2① 刘志鸿1,2 孙秀俊1,2 周丽青1,2 杨爱国1,2 张高伟1,3 (1. 农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ； 2. 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 青岛 266071 ； 3. 水产科学国家级实验教学示范中心 上海海洋大学 上海 201306) 摘要 魁蚶(Scapharca broughtonii) 的血淋巴中因含有血红蛋白而不同于其他多数双壳贝类。为明 确魁蚶血红蛋白基因的结构特征、组织发生分布、免疫活性等特点，本研究以魁蚶转录组数据库中 的部分序列为基础，通过cDNA 末端快速扩增(Rapid amplication of cDNA ends, RACE)技术，克隆 获得了一种魁蚶血红蛋白基因cDNA 全长序列(命名为SbHb Ⅰ) ，并研究了不同条件下的mRNA 表 达。序列和结构分析显示，SbHb Ⅰ基因cDNA 全长为867 bp ，其中包括长度为483 bp 的开放阅读 框(Open reading frame, ORF) ，编码160 个氨基酸，预测蛋白分子量为17.5 kDa，理论等电点为9.68 ； 氨基酸序列具有多个血红素结合位点，序列与所选其他物种的相似度范围为 57%~93% ，与蚶科相 似度较高。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示，在魁蚶成体的斧足、鳃、外套膜、闭壳肌、血 淋巴、肝胰腺及受精卵至发育23 d 的幼虫体内，均能检测到SbHb Ⅰ基因；该基因在成体魁蚶血淋 巴中表达量最高，与其他5 个组织中的表达量差异显著(P0.05) ；受精卵至23 d 幼虫期的表达，基 本呈现为先下降后上升的趋势，且在12 d 时急剧上升(P0.05) ；在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激 和低氧胁迫后，血淋巴中 SbHb Ⅰ基因的表达均呈先上升后下降的趋势，表达量最高值均出现在 16 h。本研究丰富了贝类血红蛋白相关研究资料。 关键词 魁蚶；血红蛋白；基因克隆；表达特征 中图分类号 S917.4 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2019)01-0084-08 血红蛋白(Hemoglobin)为呼吸蛋白中的一员，广 泛存在于脊椎动物、部分无脊椎动物以及一些高等植 * 中国水产科学研究院黄海水产研究所基本科研业务费专项资金(20603022016001; 20603022017002)和农业农村部农 业国际合作交流项目‒— “一带一路”热带国家水产养殖科技创新