临床医学毕业clock基因干扰质粒的构建及干扰效率测定.docVIP

clock基因干扰质粒的构建及干扰效率测定 姓 名： 2014年6月25日 作者：付天明鲁芳刘延友汪宇辉江舟甘露薛建新邹晏 王正荣 【摘要】 0的：构建clock基因的干扰质粒，为深入研究clock基因在信号 转导通路中的作用提供有效手段。方法：采用M folder生物软件选择2个clock 基因干扰位点，并根据3个干扰片段及一个阴性对照片段，定向克隆到 pGcncsil 1 丁?扰载体并测序验证。将丁?扰质粒及对照质粒分别转染至NIH3T3 细胞，并通过检测RT PCR产物量以获得干扰效率。结果：RT PCR产物检测 结果显示干扰质粒pGenesil 1/clock II干扰效率最高，其clock表达量降低了 74%,而pGenesil 1/clock 1干扰组clock表达量只降低了 2%。结论:成功构建 了对clock基因具有显著干扰效率的pGenesil 1/clock II干扰质粒，为进一步 研宂clock基因的功能奠定了基础。 【关键词】吋间生物学；生物节律；干扰质粒；RNA干扰；RT PCR； clock 基因 时间生物学(Chronobiology)是当前生命科学的热点领域，其对生物节律的研 究以新颖而独特的观点褐示着自然界和人类社会的纷繁现象，并从本质上阐释生 命活动的内在规律。自1985年第一个与生物钟相关的基因period从果蝇体内被 成功克隆以来，一系列