慢病毒介导的热休克蛋白70基因对缺血缺氧嗜铬细胞瘤细胞钙稳态的.PDF

中华危重病急救医学 2015 年 4 月第 27 卷第 4 期　Chin Crit Care Med，April 2015 ，Vol.27，No.4 · 295 · · 论著 · 慢病毒介导的热休克蛋白 70 基因对缺血 / 缺氧 嗜铬细胞瘤细胞钙稳态的影响及机制研究 【摘要】 目的 探讨慢病毒介导的热休克蛋白 70 （HSP70 ）基因表达对缺血 / 缺氧嗜铬细胞瘤（PC12 ）细 分为重组慢病毒感染组（感染含 HSP70 及荧光蛋 胞钙稳态的影响及机制。方法 取对数生长期的 PC12 细胞， 白基因的慢病毒）、慢病毒对照组 （感染含荧光蛋白而不含HSP70 基因的慢病毒）及未感染组 3 组。用反转录 - 检测转染细胞 HSP70 mRNA 表达，蛋白质免疫印迹试验（Western Blot ）检测HSP70 聚合酶链反应（RT-PCR ） 蛋白表达。PC12 细胞缺血/ 缺氧处理 4 h 后，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT ）检测细胞活性，乳酸脱氢酶（LDH ） 检测试剂盒测定细胞上清液 LDH 水平，流式细胞仪检测细胞内游离钙离子（［Ca2+ ］i ）浓度，ATP 酶试剂盒测 + + 2+ 2+ 定 Na -K -ATP 酶、 Ca -Mg -ATP 酶、总 ATP 酶活性。 结果 重组慢病毒感染组 PC12 细胞 HSP70 mRNA 和 HSP70 蛋 白表达呈阳性。经缺血 / 缺氧处理后，与慢病毒对照组和未感染组比较，重组慢病毒感染组细胞 0.395 ±0.014 、 0.363 ±0.045 ， t ＝17.996， t ＝10.600，均 P ＜0.001 ），细胞 活性明显增强（A 值：0.575 ±0.020 比 1 2 上清液中 LDH 水平明显降低（U/L ：743.46 ±23.68 比 935.43 ±34.77、 962.89 ±26.68 ， t ＝11.179， t ＝15.044， 1 2 均 P ＜0.001 ），［Ca2+ ］i 浓度显著降低〔相对荧光强度：（31.60 ±2.43 ）% 比（41.48 ±3.33 ）%、（40.40 ±3.05 ）% ， + + 2+ 2+ + + t ＝5.853 ，t ＝5.502 ，均P ＜0.001 〕，Na -K -ATP 酶、Ca -Mg -ATP 酶、总 ATP 酶活性显著升高〔Na -K -ATP 1 2 酶（μmol·mg-1·h-1 ）：8.608 ±0.307 比 6.728 ±0.173 、 6.450 ±0.091 ，t ＝9.237、 P ＝0.001 ，t ＝11.675、P ＜0.001 ； 1 1 2 2 Ca2+-Mg2+-ATP 酶（μmol mg-1 h-1 ）：10.523 ±0.036 比 7.910