临床医学毕业荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析.docVIP

荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析 姓 名， 2014年6月25日 荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析 作者：黎朋王晶高运华武利庆盛灵慧傅博强 【摘要】建立荧光标记寡核苷酸反相离子对色谱分析方法，优化了流动相醋 酸三乙胺浓度（0?0.15 mol/L），pH 4.5?7.0和洗脱强度等色谱条件。对5 mer， 10 mer和15 mer?非标记和5羧基荧光素（5FAM）标记寡核苷酸的保留进 行比较分析，研究荧光标记寡核苷酸的保留机理，并分离TaqManTM探针等多 种常用荧光标记寡核苷酸。结采显示，不同长度荧光标记寡核苷酸在0.01 mol/L 醋酸三乙胺，pH 7.0的条件下获得最大分离。荧光标记寡核苷酸的保留与非标记 寡核苷酸有明显差异，W茗可完全分离。在一定松度范ffl内非标记寡核苷酸随长 度的增加，保留时间增长；相反，荧光标记寡核苷酸的讼度增加，保留时间减短。 荧光染料疏水性对其标记的寡核苷酸在反相柱屮的保留有较大影响，荧光染料疏 水性越强，其标记寡核苷酸保留时间越长。但疏水性的影响程度随标记寡核苷酸 长度增加而逐渐变小。 【关键词】荧光标记寡核苷酸，荧光染料，反相离子对色谱，保留 1引言 人类基因组计划的完成促进了以核酸为基础的临床诊断、法医DNA鉴定、 检验检疫技术的发展，因此核酸的定性与定量分析变得越来越重要。荧光你记检 测技术的诞生极大促进了核酸测量技术的发展