轮状病毒VP4高聚体制备与其免疫保护性评价.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 李毅坚 等/轮状病毒VP4*高聚体的制备及其免疫保护性评价 281 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Feb. 25, 2019, 35(2): 281−289 DOI: 10.13345/j.cjb.180208 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·医学与免疫生物技术· VP4* 1 1 2 2 2 2 2 2 李毅坚 ，罗国兴 ，杨晗 ，贾连智 ，曾渊君 ，赵毕妍 ，李廷栋 ，葛胜祥 1 厦门大学生命科学学院 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室， 福建 厦门 361102 2 厦门大学公共卫生学院 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室， 福建 厦门 361102 李毅坚, 罗国兴, 杨晗, 等. 轮状病毒VP4*高聚体的制备及其免疫保护性评价. 生物工程学报, 2019, 35(2): 281–289. Li YJ, Luo GX, Yang H, et al. Polymerization and evaluation of the protective efficacy of rotavirus VP4* proteins. Chin J Biotech, 2019, 35(2): 281–289. 摘 要: 在前期工作中发现，截短的轮状病毒VP4*蛋白 (aa 26–476) 在大肠杆菌中能够以可溶形式表达，且在 小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高 VP4*蛋白的免疫保护性。通过 37 ℃水浴加热处理24 h 使VP4*蛋白多聚化，通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4*蛋白颗粒化 程度，通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4*蛋白与中和抗体反应性的影响；通过差示量热法分析VP4* 高聚 体的热稳定性；最后，通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4*免疫原性和免疫保护性的影响。结果表明，VP4* 蛋白高聚体结构均一，并且相比三聚体，具有更高热稳定性和中和抗体结合活性；在内毒素20 EU/mg 的条件下， 与铝佐剂混合，刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体；对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性。综上所述， VP4* 高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路。 : 轮状病毒，基因工程疫苗，VP4* 高聚体，中和抗体，免疫保护性 Polymerization and evaluation of the protective efficacy of rotavirus VP4* proteins 1 1 2 2 2 2 Yijian Li , Guoxing Luo , Han Yang , Lianzhi Jia , Yuanjun Zeng , Biyan Zhao , 2 2 Tingdong Li , and Shengxiang Ge 1 State Key of Molecular Vaccinology and Molecular Diagnostics, National Institute of Diagnostics and Vaccine Development in Infection Disease, School of Life Sciences, Xiamen University, Xiamen 361102