脓汁及粪便标本中病原菌的检测-1.pptVIP

医学微生物学实验 医学微生物学实验 医学微生物学实验课是一门操作技能很强的课程。 实验课教学的主要目标是使学生了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。 更重要的是培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。 实验分组 俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。 每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为甲、乙、丙、丁。 医学微生物学实验综合性实验一 脓汁和粪便标本中病原菌的检测（P2） 培养基的制备P2 消毒与灭菌P5 细菌的人工培养 无菌技术（录像） 摆斜面，倾注平板。 培养基的制备 培养基制备 培养基制备程序： 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸，牛皮纸，用橡皮筋扎好 →放入讲台边的高压灭菌桶或高压灭菌筐内→送到高压灭菌室（洗刷室）。 请在 30分钟内完成。 培养基 培养基是用人工的方法，将多种营养物质，根据各种微生物生长繁殖的需要而合成的一种营养制品。它的主要成分是蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和水，pH7.4～7.6。 培养基制备的一般程序： ①调配→溶化→ 矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。 ②干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定 →保存。 培养基的制备原则： (1)适当的营养成分,(2)合适的酸碱度,(3)配制后必须灭菌。 培养基的灭菌 在冷空气完全排尽的情况下，蒸汽压103.43 kPa ,温度可达到121.3℃ ,维持15-30分钟，可以杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15～30分钟。 含糖培养基：115℃灭菌15分钟。 鸡蛋、牛奶培养基:75～100℃间歇灭菌3次(1天1次)。 不耐高温的液体成分：滤菌器滤过除菌（EK型蔡氏滤器、 G5或G6玻璃滤器、0.45um或0.22um微孔滤膜） 怎样检查培养基是否合格? ★无菌试验：将待检培养基置于35℃培养箱培养24小时，无任何细菌生长为合格。 ★效果试验：将已知的标准参考菌株，接种于待检培养基中，检查细菌的生长繁殖状况和生化反应是否与预期的结果相符合。 高压蒸汽灭菌器的操作程序 冷空气的排除：灭菌室压力升至0.07MPa时，关进汽阀，开排汽阀，使压力降到零 ，排汽一次。然后关排汽阀，开进汽阀，重复以上操作。如此反复三次，方可排净冷空气。冷空气的排除是灭菌成功和失败的关键。 物品的灭菌：一般维持15～30分钟。 排除蒸汽。 灭菌物品的干燥（根据需要）。 常用蒸汽压力与相应温度 压力(磅/吋） 压力（Kpa） 相对温度(℃) 8 55.16 112.6 10 68.95 115.2 15 103.43 121.3 20 137.90 126.2 ★1标准大气压=76厘米汞柱高=1.013×105帕斯卡=14.696磅/英寸2。 ★采用2000个大气压也不能杀死细菌，真正起杀菌作用是高温。 灭菌所需时间、压力与温度指标 灭菌物品类 灭菌时间(分) 蒸汽压力Mpa 相对温度℃ 含糖培养基： 15 0.07 115 基础培养基： 15～30 0.11 121 橡 胶 类 15 0.11 121 敷 料 类 30～45 0.11～0.14 121～126 器 皿 类 15 0.11～0.14 121～126 器 械 类 10 0.11～0.14 121～126 瓶装溶液类 20～40 0.11～0.14 121～126 细菌生长繁殖的方式和速度 细菌繁殖方式：以二分裂方式进行无性繁殖。 繁殖速度：多数20～30分钟繁殖1代，结核杆菌18～20小时繁殖一代。 细菌生长繁殖曲线 细菌的生长曲线 细菌生长曲线意义 迟缓期：一般1～4h，细菌代谢活跃，但不繁殖。 对数期：维持4 ～8h，细菌快速繁殖，数目呈几何级数增加，细菌形态、染色性、生理活性最典型、对抗生素最敏感。细菌鉴定选用此期为佳。 稳定期： 通常维持10h，活菌数和死菌数几乎相等，代谢产物形成较多。 衰亡期：培养18 ～24 h以后，代谢逐渐停滞,死菌数超过活菌数。 常用玻璃器材的处理程序（示教） 新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡过夜→中和游离碱 →流水冲洗15次→晾干→包装→灭菌 。 无污染器皿:洗涤剂洗刷→…。 病原菌污