乳酸菌超氧化物歧化酶基因的克隆与特性分析.docVIP

乳酸菌超氧化物歧化酶基因的克隆与特性分析 【摘要3目的：克隆乳酸菌超氧化物歧化酶(SOD)基因丼进行特性分析。 方法：根裾已报道的乳酸菌SOD基因序列，采用PCR技术获得SOD碱基 序列，将所得的PCR产物插入克隆载体pMD 18T中，重组质粒经酶切， PCR鉴定及测序，获得的序列进行生物信息学分析。结果:成功克隆丫 SOD 基因，序列分析表明，该SOD基因由621 bp组成，编码206个氨基酸残 基，蛋白分子量为23 KD，等电点为4.96。结论：该蛋白氨基酸序列主要 以a螺旋为主。 【关键词3乳酸菌;超氧化物歧化酶;基因克隆 Clone and characteristic analysis of superoxide dismutase (SOD) in lactic acid bacteria WANG Xiao yingl ,2, MA Wen Ii1，ZHENG Wen lingl (I.Gene Project Institute in South Medical University Guangzhou 510515; 2.Key Laboratory of Molecular Biology, Hainan Medical College Haikou 571101, China) [ABSTRACT] Objective: To clone and make characteristic analysis of superoxide dismutase (SOD) in lactic acid bacteria. Methods: Based on reported genetic sequence of SOD in lactic acid bacteria, obtained base sequence of SOD by PCR. Inserted product of PCR into cloning vector pMD 18丁，and made enzyme digestion of recombinant plasmid. Implemented PCR identification and sequencing, and made bioinformatics analysis of sequence. Results: SOD gene was successfully cloned. Sequence analysis indicated the gene was 621 bp, encoding 206 amino acid residues, with the protein molecular weight as 23 KD and isoelectric point as 4.96. Conclusion: The main sequence of protein animo acid is alpha helix. ［KEY WORDS］ Lactic acid; Superoxide dismutase; Gene cloning 超氧化物歧化酶（简称SOD）是一种十分重要的生物体防止氧化损伤 的酶类,是生物化内超氧化物阴离子的清除剂,它能使有氧代谢产物:02 歧化为02和H2O2,从而清除02对生物体的毒性。自1969年首次被 McCord和Fridovich从牛血红细胞中发现和分离提取以来［1］，由于SOD 在抗氧化、抗肿瘤、抗衰老以及对抗细胞细胞凋亡［2 5］等方时起着重要 作用，在医药、食品、保健品、化妆品等行业中具有广阔的应用前景。目 前SOD大多是从天然动植物中提取，但是，提取法山于天然原料含量极 微、提取工艺复杂等原因导致制品纯度低，产量少。为解决来源的限制问 题，寻找比较经济的途径是必耍的。利用微生物特别是基因工程微生物制 取SOD的研究日益受到关注［6,7］。 乳酸菌是一类重要的工业微生物，乳酸菌不仅可以提高食品的营养价 值，改善食品风味，增加食品保藏期和附加值，而且具有特殊生理活性和 营养功能。乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，具有 降低血清脶固醇、抗肿瘤、抗哀老和免疫赋活作用［8,9］。研究证实，乳酸 菌具有不同的抗氧化活性，乳酸菌的无细胞提取物具有清除机体羟自由 基、过氧化氢的能力虽然乳酸菌的抗氧化活性已得到了证实，但 它在体内的作用机制还不是很清楚，关于它的作用机制和抗氧化活性有关 的物质需要进一步的研究。关于乳酸菌抗氧化性的研究越来越多地受到食 品科学、预防医学等许多学科学者的广泛重视。本研究中，乳酸菌SOD 基因的克隆及生物信息学分析将为乳酸菌抗氧化性的进一步研究及用基 因工程方法大批量生产SOD奠定基础。 1材料与方法 1.1材