抵抗力ElTor生物型和其它非01群霍乱弧菌.PPTVIP

弧菌科及检验 培养碱性环境 动力制动试验 刘涛 第一节 霍乱弧菌 Vibrio cholerae 烈性肠道传染病霍乱的病原菌 19世纪初至今已引起7次世界性大流行。 1817～1923年的百余年间，在亚、非、欧、美、澳等发生的六次世界性霍乱大流行——皆由古典生物型引起。 1961年开始的第七次世界性霍乱大流行至今已波及五大洲140个以上的国家和地区，报告病例数在400万以上，目前尚无停息的迹象。它们由埃尔托生物型引起。 1992年10月印度和孟加拉相继发生一种新型霍乱暴发和较大流行，这型霍乱随后在亚洲传播，至今已有印度、巴基斯坦、孟加拉、中国、泰国、马来西亚、缅甸、尼泊尔、新加坡、斯里兰卡、香港等国家和地区报告发生O139霍乱病例。2003年，WHO报告45个国家111575例病例——O139群霍乱弧菌引起。 霍乱弧菌鱼群状排列 血平板：E1Tor可产生溶血素，古典生物型霍乱弧菌不产生可溶性溶血素，不出现透明溶血环。但能产生一种蛋白分解酶可使血液消化出现草绿色环。绵羊红细胞溶解试验常作为两个生物型鉴别的方法之一。 （三）生化反应 发酵多种糖，迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖、水杨酸； 氧化酶（+） 明胶酶（+） DNA（+） 硝酸盐还原（+）吲哚（+） 霍乱患儿 粘丝试验:将0.5%去氧胆酸钠水溶液与霍乱弧菌混匀制成浓菌液，1min内悬液由混变清，变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来，霍乱弧菌呈阳性。 (1)原理：霍乱弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，当加入硫酸后生成亚硝酸吲哚，呈红色反应。(2)方法：将待检菌接种于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入浓硫酸数滴，观察结果。(3)结果：呈红色者为阳性。(4)应用：霍乱弧菌呈阳性反应，但本试验并非霍乱弧菌所特有。凡能产生吲哚并还原硝酸盐为亚硝酸盐的细菌，均可呈现阳性反应。 第二节 副溶血性弧菌 嘉兴市秀城区某餐厅因承办婚宴发生一起食物中毒事件。 2004年4月28日中午12时左右，婚宴10桌，100人就餐。从当日17时起，就餐人群开始出现病人，至次日11时，中毒病人31人，罹患率为31％。症状主要为腹痛、腹泻、恶心、呕吐等胃肠道症状。 副溶血性弧菌广泛生存近岸海水和鱼贝类等食物中，温、热地带较多。我国华东沿海该菌的检出率为57.4～66.5％，尤以夏秋季较高。海产鱼虾的带菌率平均为45～48％，夏季可高达90％。腌制的鱼贝类带菌率也可达42.4％。 （二）生物学特性 1. 形态 革兰阴性菌， 有鞭毛（极毛） ，无荚膜，无芽胞 2. 抗原结构 耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的O抗原有13种 鞭毛抗原，不耐热，无型特异性 3．培养特性 营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为3.5%，超过8%不能生长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长，最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌 可形成菌膜 培养特性 TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落 普通血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻（wagatsuma）琼脂上产生β溶血现象，称为神奈川现象（Kanagawa phenomenon, KP） 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透明，无粘性 SS平板: 扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易 刮下，48h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长 麦康凯平板: 部分菌株不生长 伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离 抵抗力 抵抗力弱 不耐热，90℃ 1min即被杀死 淡水中不超过2日，但海水中能存活47天以上 耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡 （三）微生物检验 1. 检验程序 微生物检验 2. 标本采集: 可采集患者的粪便，肛门拭子和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或卡-布运送培养基中送检 3.分离培养与鉴定 (1)增菌培养 标本接种1%NaCl碱性胨水或4%NaCl蛋白胨水 中进行选择性增菌 (2)分离培养 标本直接接种或增菌后接种TCBS平板或嗜盐菌 选择平板 TCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径 1~2mm微突起菌落 嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混 浊、半透明或不透明、无粘性菌落 （3）鉴定 氧化酶阳性，O/129（150μg）敏感 发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。 吲哚试验阳性 大部分菌株脲酶阴性，V-P阴性