尿素Urea检测试剂盒脲酶波氏微板法.PDF

上海源叶生物科技有限公司 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法) 产品简介： 尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主 要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。尿素检测方法大致分为化学方法和酶学方法， 后者被认为是间接方法，先经尿素酶分解尿素为铵离子，然后根据波氏反应，检测铵离子 生成量。 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化 碳，铵离子与苯酚反应，生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光 度比色法(分光光度计)测定560nm 处吸光度。该试剂盒可用于检测人体、动物的血浆、血 清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液最好经过处理后再行检测。该试剂 盒 用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 试剂(A): 尿素标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 脲酶溶液 0.2ml -20℃ 避光 试剂(C): 脲酶稀释液 3ml 4℃ 试剂(D): Urea 显色液 10ml -20℃ 避光 试剂(E): Urea assay buffer 10ml -20℃ 避光 试剂(F): ddH2O 10ml RT 自备材料： 1、离心管或小试管 2、水浴锅或恒温箱 3、96 孔板 4、酶标仪 操作步骤( 供参考) ： 1、准备样品：血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒 测定，-20℃冻存。如为尿液样品，最好处理后检测，方法如下：取1ml 尿液样品，加 入沸石0.5g，加入无氨蒸馏水至25ml，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置 400-666-5481 后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25。 2、配制标准品工作液：取尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L) ：ddH2O=1:19 的比例混合，使浓度达 5mmol/L，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)。4℃保 存 1 周有效。 3、配制脲酶工作液：取脲酶溶液，按脲酶溶液：脲酶稀释液=1:99 的比例混合，即为脲酶 工作液。4℃避光保存 1 月有效。 4、Urea 比色操作：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入， 并注意避免产生气泡。如果样品中的Urea 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后 再进行测定。 加入物 空白孔 标准孔 测定孔 ddH2O/μl 10 — — 尿素标准(5mmol/L)/μl — 10 — 待测样品/μl — — 10 脲酶工作液/ml 0.02 0.02 0.02 充分混匀，37℃水浴 15min。 酚显色液/ml 0.1 0.1 0.1 Urea assay buffer/ml 0.1 0.1 0.1 5、Urea 检测 ：充分混匀，37℃水浴20min，分光光度计检测 560nm 吸光度，比色杯光 径 1.0cm，空白管调零，读取各管吸光度，分别为A 标准、A 测定。 计算： 尿素(mmol/L)=(A 测定/A