胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失.PDF

ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2004年3月15日 第12卷 第3期 751 • 临床经验• 胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失 齐 健,朱尤庆,杨 冬,张友才,张蔚英,刘 军,魏 芸 齐健,朱尤庆,杨冬,张友才,武汉大学中南医院消化内科 联系 从而探讨MGMT基因启动子高甲基化在胃癌发 湖北省武汉市 430071 张蔚英,刘军,魏芸,武汉大学医学院病毒所 湖北省武汉市 430071生 发展中的作用. 2002年湖北省科技攻关计划资助项目, No. 2002AA301C84 项目负责人:朱尤庆, 430071,湖北省武汉市武昌区东湖路169号,武汉大 学中南医院消化内科. uqing_zhu@ 1材料和方法 电话: 027 收稿日期: 2003-08-23接受日期: 2003-10-22 1.1材料 胃癌组织47例及相应的癌旁正常组织来自武 汉大学中南医院外科手术患者 男26例 女21例 年 摘要 龄31-68(平均54.8岁).癌旁组织为距肿瘤5 cm的正常 目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动 组织 经病理证实不存在不典型增生.正常胃黏膜组织 子甲基化状况在胃癌发生 发展中的作用. 20名来自门诊的健康志愿者.所有标本均取2份 1份 立即放入-70冰箱保存 1份用甲醛固定 石蜡包 方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃 埋后保存.所有患者术前均未接受过放化疗. 黏膜组织 38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT 1.2方法 以传统的酚-氯仿方法从上述各种组织中提 基因启动子的甲基化状况 用免疫组化方法检测MGMT 取DNA.按James 1996 蛋白的表达情况. [7] 93:9821)描述的方法用亚硫酸氢钠可对DNA进行化学 结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组 修饰 并用Wizard DNA纯化试剂盒(promega公司)纯 织存在MGMT基因启动子甲基化 正常胃黏膜组织均不 化 分别以MGMT基因甲基化和非甲基化引物进行扩 存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织 增.甲基化的引物序列上游为5 MGMT蛋白失表达 其中7例(70.0%)存在启动子甲基化. TAG GTT TTC GC-3下游为5 胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺 CGA AAA CGA AAC G-3;非甲基化的引物序列上游 失存在显著联系(P0.001). 为5 3 下游为5 结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲 [8] CAA AAC A-3.反应条件为95 预变性360 s然 基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因 后94 45 s59 45 s72 60 s35个循环后 高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失 可能是胃癌发生 [6, 8]