肌细胞增强因子MEF2D在结直肠癌侵袭转移中的作用和分子机制研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

目 目 录 缩略词表 一l 英文摘要 ．，3 中文摘要 ．．7 论文正文肌细胞增强因子MEF2D在结直肠癌侵袭转移中的作用和分子机制研究 ．10 第一章前 言 lo 1．1选题依据 ．．10 1．2研究背景 ．．1 1 1．3研究内容 13 1．4研究意义 ．．13 第二章MEF2D在临床肠癌标本中的表达及其临床意义 ．14 2．1 MEF2D在结直肠癌组织，癌旁和正常肠上皮中表达的比较 15 2．1．1材料和试剂 ．15 2．1．2实验方法 16 2．1．3结 果 ．．17 2．2 MEF2D表达与肠癌病人的临床病理特征及预后的相关性分析 19 2．2．1材料和试剂 ．19 2．2．2实验方法 19 2．2．3结 果 19 2．3讨{念 22 2．4小 结 22 第三章MEF2D对肠癌细胞侵袭转移能力和上皮或间质样表型的影响 ．23 3．1 MEF2D在不同侵袭力和表型的肿瘤细胞中表达的差异及其与侵袭能力的 相关性 ．．23 3．1．1材料与试剂 23 3．1．2实验方法 25 3．1．3实验结果 27 3．2 MEF2D对结直肠癌细胞侵袭和迁移的作用 。29 3．2．1材料与试剂 ．29 万方数据 3．2．2实验方法 3．2．2实验方法 30 3．2．3结 果 ．．34 3．3 MEF2D敲低或过表达对肠癌细胞上皮或间质样表型的影响 36 3．3．1材料与试剂 36 3．3．2实验方法 37 3．3．3结 果 39 3．4 MEF2D在小鼠体内肠癌成瘤及转移的作用研究 42 3．4．1材料与试剂 42 3．4．2实验方法 ．43 3．4．3结 果 44 3．5讨 论 ．．46 3．6小 结 46 第四章MEF2D通过直接转录调控上皮间质转化关键基因ZEBl参与肠癌细胞 的上皮间质转化 一48 4．1 MEF2D能调控EMT关键转录因子ZEBl的表达 ．49 4．1．1材料与试剂 49 4．1．2实验方法 51 4．1．3结 果 52 4。2证明ZEBl是MEF2D直接转录调控的靶基因 ．55 4．2．1材料与试剂 55 4．2．2实验方法 56 4．2．3结 果 60 4．3 MEF2D对ZEBl启动子的核心组蛋白乙酰化水平的影响 62 4．3．1材料与试剂 62 4．3．2实验方法 ．62 4．3．3结 果 63 4．4讨{仑 65 4。5小 结 67 第五章MEF2D在肿瘤微环境多种信号诱导上皮间质转化和ZEBl表达中的作用 68 5．1多种肿瘤微环境EMT诱导因素对MEF2D表达的激活作用 68 5．1．1材料与试剂 一68 万方数据 5．1．2实验方法 5．1．2实验方法 69 5．1．3结 果 ．．70 5．2 MEF2D在微环境信号诱导上皮间质转化过程中的必要作用 72 5．2．1材料与试剂 72 5．2．2实验方法 72 5．2．3结 果 72 5．3 MEF2D在微环境信号诱导ZEB l表达上调中的必要作用 74 5．3．1材料与试剂 74 5．3．2实验方法 74 5．3．3结 果 75 5．4讨 论 79 5．5小 结 80 全文总结 ．．81 参考文献 ．84 文献综述MEF2家族转录因子：从发育到肿瘤中的多种胞内外信号汇集的枢纽 88 参考文献 ．．93 攻读博士学位期间发表的论文 ．．96 致 谢 一97 万方数据 第三军医大学博士学位论文缩略词表 第三军医大学博士学位论文 缩略词表 英文缩写 英文名称 中文名称 Ab antibody 抗体 Amp ampicillin 氨苄西林 bFGF basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因子 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 cDNA cOmplementa巧DNA 互补脱氧核糖核酸 CDS coding sequence 编码区 ChIP ctlromatin immunoprecipitation 染色质免疫共沉淀 CoCl， cobalt chloride 氯化钴 d day 天 DAPI 4’．6一diamidino一2一phenylindole 4’，6一二脒基．2．苯基吲哚 ddH20 double distilled H20 双蒸水 DMEM dulbecco’S modified Egle medium 改良Eagle培养基 DNA deoxy ribonucleic acid 脱氧核糖核酸 EDTA ethylenediaminetetraccetic acid 乙二胺四乙酸 EGF epidermal growth factor 表皮生长因子 EMT epithelial—mesench2rrmal transition 上皮间质样