机械拉伸对血管平滑肌细胞增殖及凋亡影响的初步研究-外科学（骨科学）专业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文中英文缩略词表 解放军医学院硕士学位论文 中英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 EC Endotllelial cell 内皮细胞 VSMC 、，缸e山ar smootll muscle ceU 血管平滑肌细胞 Mecllarlical妣tCh 机械拉伸 Ⅱ．S№～ 伽Smootll mllscle act证 伍平滑肌肌动蛋白 ERK Ex缸aCellular si印a1．regulated妯1舔e 细胞外信号调节激酶 M眦Ⅲ一2 Matrix metallo proteinaSe 2 基质金属蛋白酶2 NF．1【B Nuclearfactorl【B pa廿1ways 核因子l【B通路 PCNA Prolifemtillg cell nuclear antigen 增殖细胞核抗原 MCP．1 Monoc”e chemoaHracta咀t proteill 1 单核细胞趋化蛋白1 PDGF Platelet．d嘶ved gro、他矗actor 血小板衍生因子 TGF—p Tr孤sf．0砌Iillg gro、汕f犯or-p 转化生长因子-p VEGF Ⅷcular endothelial growm f．actor 血管内皮生长因子 万方数据 解放军医学院硕士学位论文作 解放军医学院硕士学位论文 作 者：房卓群 学科专业：骨科学 导 师：粱向党 题 目：机械拉伸对血管平滑肌细胞增殖及凋亡影响 的初步研究 中文摘要 研究背景 本研究源自对大量临床现象的理性思考：机械应激是组织修复的重要因素， 减轻机械应激可以减轻组织过度修复。皮肤修复过程中，关节活动区域的瘢痕面 积常常较非关节区域的大；骨折断端由于固定不牢固常常会引起骨痂的大量增生， 即组织过度修复，而骨折断端的绝对制动后极少或不引起骨痂形成。由此，本研 究推断机械应激是影响组织过度修复的重要因素之一。本课题组前期研究发现： 1、滴加Q．氰基丙烯酸酯粘合剂可以减轻血管的过度运动；2、抑制血管的过度运 动可以抑制血管内膜过度增生。许多学者研究机械应激对细胞的影响，研究范围 广泛。本研究是在细胞及分子生物水平上探讨机械应激对细胞增殖、凋亡的影响， 通过对大鼠胸主动脉平滑肌细胞施加机械拉伸力，检测在增殖及凋亡方面的变化， 探索涉及的相关基因、蛋白及因子。 目的 为进一步在细胞生物学水平上验证机械应激可以导致组织过度修复，本研究 利用Flexcell．5000T细胞拉伸装置，对大鼠胸主动脉平滑肌细胞施加机械拉伸力， 通过调控拉伸力大小和拉伸时间，观察力学前后细胞在分子生物水平上的变化， 检测涉及细胞增殖及凋亡的相关基因、蛋白及因子。 方法 (1)原代细胞提取及传代培养：对体重在200．2209的雄性SD大鼠胸主动 脉取材，组织贴块法获取原代平滑肌细胞，传至3．8代用于后续实验。 万方数据 解放军医学院硕士学位论文(2)细胞接受FX一5000T机械拉伸：将VSMCs以3x105个／ml的密度接种 解放军医学院硕士学位论文 (2)细胞接受FX一5000T机械拉伸：将VSMCs以3x105个／ml的密度接种 于Bioflex 6孔培养板上，拉伸强度范围o~30％，拉伸时间0～120miIl。 实验组：A组5％；B组10％；C组15％：D组20％；E组25％；F组30％ 拉伸强度；对照组：0％；观察时间均为0，15，30，60，120m血，频率均为1Hz。 (3)通过流式细胞仪分析各组细胞周期，显微镜观察记录细胞形态，细胞 计数仪计算细胞计数，M1vr法分析细胞增殖，流式细胞仪分析各组细胞凋亡， ImPCR分析细胞增殖相关基因：Ⅱ．SMA，ERK，MMP．2，N下．kB，PCNA水平， Westem blot分析相关蛋白水平，ELISA检测MCP．1、PDGF、TGF．p、VEGF细 胞增殖相关因子的含量，分析细胞凋亡指标过氧化氢含量。 结果 (1)B组10％拉伸强度持续15mill时细胞周期S期比例最高，为54．65％； F组30％拉伸强度持续60111ill细胞周期S期比例最低，为8．17％。与对照组相比， P0．05。 (2)B组10％拉伸强度持续15Il血l细胞计数最多，为5675x106；F组30％ 拉伸强度细胞计数最少，为2636x106。与对照组相比，Po．05。 (3)B组10％拉伸强度在波长570胁测光吸收度值最高，为1．01；F组30％ 拉伸强度在波长570眦测光吸收度值最低，为0．60。与对照组相比，P0．05。 (4)E组25％拉伸强度持续60min时细胞凋亡比例最高，为25．64％；B组 10％拉伸强度在0面n细胞凋亡比例最低，为4．34％。与对照组相比，PO．05。 (5)10％强度持续15IIlim．S