免疫介导的脊髓运动神经元损伤过程中神经丝异常的研究-神经病学专业毕业论文.docx

中文摘要懈-L)，神羟丝中链(弱el矾湎j釉嘶mi捌e 中文摘要 懈-L)，神羟丝中链(弱el矾湎j釉嘶mi捌e cha函，ⅪIM)和神经兰室重链 (麓嘴娟l触鼢差heaw矗a遮，硎)。和其他中间丝蛋自一样，神经丝的 三个亚单位均禽有一个由程螺旋轷状区构成的单聚体的中心区，一个与 神经丝装配有关的头区删南及一个羧基(C-)尾区。》浮-H及Ⅻ奇嗵的羧基慝 区较搿．L的犀区长，并且从核心丝囱倜方投射，形成稠臂固de．糊》。 夺匝一H及艟一M的铡臂内含有大量韵KSP(Ly馨Sef-Pm)序列，在轴索内 被广泛磷酸化，对于神经丝之间及神经丝与其健轴浆成分之问的相互接触 过程中起重要的作弱。 有大量证据表跚含有磷酸他谰F-H侧臂的硼F在核周体的异常聚集与 多神神经交性疾病豹发病有关，包括运动神经元病《穗9瞬稳蝴I渤d汝：asie， 渤)或瓤萎缩侧索硬化(龌戮’哲iDp糙c l蹴稠scl￡嘲is，舢塔)。圆此研 究调节Ⅺ．H弼臂磷酸他的机糊对于研究正常神经元的生理功旄及某些疾 病状态的病理机制是十分有意义的。 细胞厨期素依赖蛋白激酶《盼d峋end喊融5，CD飚)是纽胞 周朝素依赖蛋白激酶家族(四e洳却d髓莹k抽签es，④Ks)成员，但是， 它不参与细胞周期豹调节。相爱，与有丝分裂激活蛋自激酶 (越油鬈e魏．ae6奶越pr0耗in kinase，MAPK)、n乳m N端激酶(舱K)、糖原 合成激酶3(毋瑚窖en s辨凼ese killase 3，GS瞄)等共同组成髓氨酸醍定 的色岗：氨酸激酶(proliIle di删se|商矾蛔e0|I面e kiIl鹳es，PDKs)，磷酸 他神经丝、微管相关蛋白、Tau蛋白、龇等的尉沿序列。生理情况下， CD酗锚定于细胞膜下，在环境因素、缺血、缺氧及氧化损伤、兴奋性毒 性等病理情况下，胞浆内ea2}水平增加时，激活跚pa抽，导致(脚易 位到胞浆，磷酸化“生理性”底物如ⅫⅧ、佘潭捌、微管相关蛋白、h旺 蛋画及MAP2等，导致神经元变性、死亡。研究认为CD飚在一些以细胞 骨架蛋白异常磷酸化为特征的神经系统变性疾病如阿尔采海默病 (铷曲e曲酉。s dise鲳e，AD)、蛐金森病(P面涵son’s击sease，PD)、弥漫 性k哪体病、进行性核上性麻痹(舯p鳓s：溉踟脚l￡艇pa姆，PsP)、 舰萎缩绸索硬化、多系统萎缩(硼向癣Ile syS拄胍撒坤hy，MSA)及Ni删 两病的发病过程中具有重要的作用。 基于上述理论，本实验通过观察免疫介导的神经元损伤过程中：神经丝 异常的特征，及神经丝异常的发生机制，为ALS发病机制的研究提供帮 2 中文摘要助。本研究分筠三个部分：第一部分，稠用新鲜牛脊髓前角成份免疫自化 中文摘要 助。本研究分筠三个部分：第一部分，稠用新鲜牛脊髓前角成份免疫自化 病远交系豚鼠，建立实验性自身免疫性灰质痛模型；第二部分，通过不同 螅方法观察免疫介导的神经元授伤过程中神经丝异常的特征；第三部分， 观察免疫介导豹神经元损伤过程中a※5的表达特征，探讨神经丝异常 磷豌化及异常聚集的机制，为舰萎缩饲索硬化发病机制研究提供可能豹理 论蔽据。 第一部分EAGMD模型鲢建立 目的：根据瓤萎缩侧索硬他的自身免疫异常的机制，参考黜矧涨 晌描述，剩髑牛脊髓前角免疫自化病远交系蛐豚鼠，建立EAQ圆模 型，为进一步研究免疫介导豹脊髓前角运动神经元损伤过程中神经丝异常 徽前期准备工作。 方法：取新鲜牛脊髓前角180~250嚣毽(湿重)首次加0．1 M P8S O．5越 及完全弗氏佐荆O．5面制成油包永乳剂，在白化病远交系h删y源鼠背部 皮下多部位注射， 4周后，戳相同量的脊髓前角加0．】M鞠}S O．5棚及不 完全弗氏佐渤O．5面制成油包水乳剂，以相同韵方法在豚鼠背部皮下注射。 跌黼，每隔4周重复一次免疫，前后共4次。免疫对照组不加抗原，邸首 次以O．1 M PBS O．5蠲及完全佛氏佐裁O．5面割成漓包水乳剂，以后用O-1 M豫S O．5 II|l及不完全佛氏佐剂0．5面制成油包水乳剂，鄹同实验组糯同 的方法，在豚鼠背部皮下多都位注射。抗原提取及制备过程在4℃条件下 进’行，免疫注射过程尽量无菌操作。实验动物分为免疫组20只、免疫对照 组10只、正常对照组10只。 免疫后，每天观察动物肢体活动情况及力量，每周测量体重，观察毛 皮营养状态及动物饮食情况，以针刺皮肤观察感觉异常，观察肛门粪便残 留了解有无排便异常。对所有免疫后趋豚鼠每月进行同心圆针电极肌电图 检查一次，正常组作为嗣性对照，观察飘肉购失神经改变。实验结束时， 取动物后蔽肌、脊髓颈、腰彩大、大脑皮层及赫干组织，观察舰肉萎缩情 况、脊髓前角运动神经元、大脑皮层锤滩细胞及脑干运动核团神经元变性、 丢失情况，通过免疫组化方法观察神经舰肉接头处及脊髓前角免