肌肉生长抑制素基因敲除肉牛的研究-动物学专业论文.docxVIP

赵丽华 赵丽华 肌肉生长抑制素基因敲除肉牛的研究 目 录 摘要 。1 ABSTRACT ．．3 缩略词表 5 第一部分：实验部分 。8 第一章牛柳7Ⅳ基因敲除打靶载体的构建 8 1材料与方法 ．8 1．1材料 一。8 1．2方法 。9 2结果 l 3 2．1和牛脚刀V基因的表达检测 13 2．2埘ZⅣ基因敲除打靶载体pPLP．MSTN的构建 14 2．3脸ZⅣ基因敲除无启动子打靶载体PIⅡ．MSTN的构建 ．．18 3讨论 ．．2 1 参考文献 ．24 附图1：解7Ⅳ基因敲除打靶载体pPLP—MSTN构建流程图 。26 附图2：旌删基因敲除无启动子打靶载体P ．MSTN构建流程图 27 第二章朋研基因敲除牛胎儿成纤维细胞的制备 。28 1材料与方法 。28 1．1材料 。28 1．2方法 29 2结果 ．34 2．1胶原酶消化法分离培养牛胎儿成纤维细胞的形态学观察 。34 2．2牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 ．35 2．3牛胎儿成纤维细胞电击参数的筛选 ．35 2．4牛胎儿成纤维细胞对G418抗药性的检测 。35 2．5基因敲除打靶载体pPLP．MSTN和PⅢ．MSTN的纯化与线性化 ．36 2．6牛胎儿成纤维细胞的转染、筛选及单克隆细胞的扩大培养 ．36 内蒙古大学 内蒙古大学 硕士学位论文 2．7中靶克隆的PCR鉴定与测序分析 37 2．8牛胎儿成纤维细胞的染色体数