病毒的纯化和检测-改.ppt

病毒的纯化和检测-改;二、标本的采取与送检;三、病毒和病毒成份的提纯 ;在病毒不失活的前提下，从宿主细胞中释放出来； 病毒的纯化可以应用提纯蛋白质的技术方法； 对大小、形状和密度高度一致的病毒粒子， 可以采用分级分离的技术。;四、病毒萃取液的分级纯化;病毒的感染单位（IU）：能够引起宿主或宿主细胞发生一定特异性反应的病毒最小剂量； 病毒效价：指单位体积(ml)病毒悬液的感染单位数目(IU／ml)或称毒力 ； 噬菌体效价（pfu) ：又称噬菌斑形成单位数指单位体积的噬菌体，能使感染细菌裂解，产生噬菌斑的数量。;;二、病毒的培养; 细胞的变化 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 ;3.干扰现象(interference) 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 ;(二) 病毒的数量与感染性测定 ;2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50%组织细胞感染量。;三、病毒感染的血清学诊断;2.中和试验(neutralizing test,NT test);3.补体结合试验 (complement fixation test,CF test);补体结合试验图示;5. 酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA ）;ELISA的基本类型;此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例, 将抗原吸附于固相载体；加入待测抗原和一定量特异性抗体，使固相抗原与待测抗原二者竞争与抗体结合；经过洗涤分离，最后结合于固相的抗体与待测抗原含量呈负相关。;此法常??于测定抗原, 将已知抗体吸附于固相载体, 加入待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗涤，加入酶标抗体和底物进行测定。;此法是测定抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本(含相应抗体)与之结合。洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。 ;四、病毒核酸检测;基因芯片技术