具有人参皂苷Rb1转化能力菌株的筛选与鉴定-农产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文, 是本人在导师的指导下, 独立进行研究工作 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外, 本论文不含任何其他个人或集体已经 发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体, 均已在文中 以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权说明 本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定, 即:按照学校要 求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版, 并 提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存 论文；在非保密的论文范围内, 学校可以公布论文的部分或全部内容。 （保密论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名: 导师签名: 日期: 年 月 日 III 摘要 摘 要 人参皂苷因其糖苷键的变化而衍生出很多种类的皂苷，近年来人们越来越重视 皂苷成分的药用价值，而常见皂苷的转化、生成的稀有皂苷的研究及其生理活性、 药用价值则更是备受关注，具有很好的发展前景。 本文选用从泡菜汁中分离出的几十种微生物菌株来进行人参皂苷 Rb1 的转化， 通过与标准品的比对，薄层色谱法（TLC）分析显示能转化成人参皂苷 Rb1 为其他稀 有皂苷的菌株有 13 种，本文选取转化能力较强 3 种菌株进行发酵并对菌株进行鉴定。 对三种菌株的最佳培养条件和发酵条件进行了探索，培养条件的优化利用菌体 浓度来表征，而最佳发酵条件是通过测定酶活力来体现，测定方法是采用了测定β- 葡萄糖苷酶的活力的方法，通过测量以 pNPG 为底物的水解酶分解成 pNP 及葡萄糖， 实验结果表明：菌株 MC02、MC04 和 DR06 的最佳培养条件都是在 MRS 培养基上， 置于 37oC 恒温培养箱中培养 4h~6h，培养基的 pH 值调至 6.5~8.0；最佳发酵过程的 条件三种菌株在振荡培养箱中用 30oC，反应体系 pH 值在 6.0~7.0，酶活力最强的反 应时间是 72h。 利用高效液相色谱法定性分析了各菌株的转化产物。其中菌株 MC02 在培养 24h 时生成人参皂苷 Rd 和 F2，48h 后培养液中出现人参皂苷 C-K，72h 以后完全转化成 人参皂苷 C-K；菌株 MC04 在培养 24h 的菌液能转化人参皂苷 Rb1 生成人参皂苷 Rd 和七叶胆苷 GXVII，48h 后 GXVII 逐渐消失并伴随着出现人参皂苷 C-K，在 72h 以 后也完全转化为人参皂苷 C-K；菌株 DR06 在 24h 的时候生成人参皂苷 Rd、七叶胆 苷 GXVII 和人参皂苷 F2，48h 以后有人参皂苷的 C-K 的生成，72h 以后完全转化生 成 C-K 并没有其他人参皂苷成分检出。 利用PCR技术，扩增了菌株的16S rRNA，并通过在基因库进行比对初步鉴定出 菌株。菌株MC02与 Leuconostoc citreum IH22 AF111949.1菌株相似度为98%；菌株 MC04与Leuconostoc mesenteroides FJ655776.1相似度为98%；菌株DR06与Lactobaci llus brevis EF120367相似度为99%。 关键词：人参皂苷；Rb1；生物转化；C-K I A Abstract Classification of ginsenoside is because of the difference between the glycoside, more and more attention were paid to the medicinal value of it in recent years. The study on ginsenoside transformation,generation of rare components and its physiological activity, medicinal value, is even more cause for concern,has great prospects for development. This study screened dozens of fungin strains which were isolated by lactic acid bacteria from Kimchi. By comparing with standard ginsenoside, TLC analysis showed that 13 kinds of strains can transform ginsenoside Rb1