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第三章 转录及其调控 一、基本概念 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 参与转录的物质 原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板:DNA 酶: RNA聚合酶 其他蛋白质因子 RNA链的延伸图解 第一节 原核生物转录 DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 原核生物RNA聚合酶能直接与模板DNA的启动序列结合而启动转录。 一、原核生物转录酶及相关因子 （一）原核生物RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 原核生物RNA聚合酶的活性，可被某些抗生素特异性的抑制。 如抗结核分枝杆菌药物利福平或利福霉素专一性的结合β亚基。 ρ因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ρ因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强。 ρ因子还有ATP酶活性和解链酶(helicase)的活性。 二、原核生物转录过程 转录的起始（模板识别、转录起始） 转录的延伸 转录的终止 ● 原核生物启动子结构 原核典型启动子的结构 -35 -10 转录起点 TTGACA 16-19bp TATAAT 5-9bp （二）原核生物转录延长 ● （大肠杆菌）?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； ●在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。 RNA链的延伸图解 （三）原核生物转录终止 依赖Rho 因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止 2.非依赖?因子的终止（强终止子－内部终止子） 终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区，RNA形成发夹结构； 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，长度 效率 （一） 真核生物RNA聚合酶 真核生物RNA聚合酶的结构比原核生物复杂，所有真核生物的RNA聚合酶都有两个不同的大亚基和十几个小亚基。 RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成，其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)以羟基氨基酸为主体组成的重复序列 (YSPTSPS)n，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。CTD对于维持细胞的活性是必需的。 RNA聚合酶II与启动子的结合、启动转录需要多种蛋白质因子的协同作用。通常包括：可诱导因子或上游因子与增强子或启动子上游元件的结合；通用转录因子在启动子处的组装；辅激活因子和/或中介子在通用转录因子/RNA聚合酶II复合物与可诱导因子、上游因子之间的辅助和中介作用。因子和因子之间互相辨认、结合，以准确地控制基因是否转录、何时转录。 为了保证转录的准确性，不同基因需不同转录因子。 拼板理论(piecing theory) ：少数几个反式作用因子（主要是可诱导因子和上游因子）之间互相作用，再与基本转录因子、RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。可诱导因子和上游因子常常通过辅激活因子或中介子与基本转录因子、RNA聚合酶结合，但有时也可直接与基本转录因子、RNA聚合酶结合。 二、真核生物的转录过程 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物(pre-initiation complex, PIC) 。真核生物的转录终止过程也不相同。 真核生物转录过程： 起始：真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。转录起始前复合物(PIC)的组装。 延长：类似原核生物。（核小体移位和解聚） 终止：与转录后修饰有关，转录终止修饰点切断加尾。 真核生物转录生成的RNA分子是初级RNA转录物(primary RNA transcript)，几乎所有的初级RNA转录物都要经过加工，才能成为具有功能的成熟的RNA。 加工主要在细胞核中进行。 GU—AG法则（chambon法则）：大多数内含子都以GU为5?端起始，以AG为3? 端末尾，5? GU…… AG 3? 称为剪接接口或边界序列 内含子内部的部分保守序列也可能参与内含子的剪切 如：3‘端AG附近有一段富含嘧啶的区域 5’端有一保守序列GUPuAGU 发生分叉剪接的核mRNA内含子3‘端上游18-50核苷酸处，存在保守区，其中的A绝对保守，且具有2’—OH，是参与形成分叉剪接中间物的特定腺嘌呤。（分支点的序列） 1.有利于物种进化的选择 2.基因表达中有调控功能 3.有些内含子可编码酶 内含子的分类 根据基因的类型和剪接的方式分类